長（zhǎng）沙微生物實驗室裏的滅菌法（fǎ）你知道嗎？-行業新聞-湖南貝塔實驗室設備有（yǒu）限公司

當前位置：網站首頁 > 新聞中心 > 行業新聞

行業新聞

目錄導航

熱門產品

長（zhǎng）沙湖南（nán）實驗台-01

熱（rè）門新聞

關鍵詞: 實驗室湖南微（wēi）生物實驗室

長沙微生（shēng）物實驗室裏的滅菌法你知道嗎？

時間: 2021-12-09 10:05:32 來（lái）源（yuán）: 湖南貝塔實驗室設備有限公司

微生物實驗室常用的器材一般包（bāo）括玻璃器材、金（jīn）屬器械、橡膠製品及塑料製品等，每類器材的（de）處理及消（xiāo）毒（dú）措施都有不同。嚴格的消毒滅菌工作（zuò）極（jí）為重要，直接（jiē）影響著整個實驗（yàn）能否順利進行。下麵就和貝塔的小（xiǎo）編一起來看看微生物實驗室有哪些消毒滅菌的方式吧！

一、消毒滅菌方法

目前，常用的消毒滅菌方法多采用物理（lǐ）方（fāng）法(如，幹熱滅菌法、濕熱滅菌法、過濾除菌法、射線殺菌法等)和化學方法(消毒劑、抗生素)兩大類。

1.幹熱滅（miè）菌法
  是利用恒（héng）溫幹燥箱內120℃-150℃的高熱，並保持90-120分鍾，殺死細菌和芽孢，達到滅菌（jun1）目的的一種方法。主（zhǔ）要適用於不便在壓力蒸（zhēng）汽滅菌器（qì）中進行滅菌，且不易被高溫（wēn）損壞的（de）玻璃器皿（mǐn）、金屬器械以及不能和蒸（zhēng）汽接觸的物品的滅菌。用此方法滅菌（jun1）的物品幹燥，易於貯存。酒精燈火焰燒灼滅菌法也是屬於幹熱滅菌的方法（fǎ）之一（yī），在（zài）進行動物細胞體外培養工作時，常須利用工作台麵上的酒精燈火焰對金（jīn）屬器具及玻（bō）璃器（qì）皿口緣進行補充滅菌。
2.濕熱（rè）滅菌法
  壓力蒸汽濕熱滅菌法是目前朂常用的一種滅菌方法。它（tā）利用高壓蒸汽以及在蒸汽環境中存在的潛熱作用和良好的穿透力（lì），使菌體蛋白質凝固（gù）變性而使微生物死亡。適合於布類工作衣、各種器皿（mǐn）、金屬器械、膠塞（sāi）、蒸餾水、棉塞、紙和（hé）某些（xiē）培養液的滅菌。高壓蒸汽滅菌器的蒸汽壓力一般調整為1.0-1.1 kg/cm2，維持20-30min即可達到滅（miè）菌效果。
3.射線滅菌（jun1）法
  利用紫外線燈進行照射滅菌（jun1）的（de）方法。紫外線是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種（zhǒng）微生物。紫外線的作用機製是通過對微生物的（de）核（hé）酸及蛋白質等的破壞作用而使其滅（miè）活。適（shì）合於實驗室空氣、地麵、操（cāo）作台麵滅（miè）菌。滅菌時間為（wéi）30min。用紫外線殺（shā）菌時應注意，不能邊照射邊進行實驗操作，因為紫外（wài）線不僅對人體皮膚有傷（shāng）害，而且對（duì）培養（yǎng）物及一些試（shì）劑等也會產生不良影響（xiǎng）。
4.過濾除（chú）菌法
  是將（jiāng）液體或氣體通過有（yǒu）微（wēi）孔（kǒng）的濾膜過濾，使大於濾膜孔徑的細菌（jun1）等微生物顆粒阻留，從而達到除菌（jun1）的方法。過濾除（chú）菌法大多（duō）用於遇熱易發生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養液等。
目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正壓過濾除菌，或用玻（bō）璃細菌濾器（qì）、濾球負壓過濾除菌。濾膜孔徑應在0.22-0.45μm範圍內或（huò）用更小的細（xì）菌濾膜，溶液通過濾膜後（hòu），細菌和（hé）孢子等因大於濾膜孔徑而被阻，並利用濾膜的吸附作用，阻製小於濾膜（mó）孔徑（jìng）的細菌透（tòu）過。
5.化學（xué）消毒（dú）劑消毒法
  用於那些不能利（lì）用物理方法進行滅菌的物品、空氣、工（gōng）作麵、操作者皮膚、某些實驗器皿等（děng）。常用的化學消毒劑包括甲醛、高錳酸鉀、70%-75%乙醇、過氧乙酸、來蘇爾水、0.1%新潔爾滅（miè）、環氧乙烷、碘伏或碘酊等。其中利用（yòng）70%-75%乙醇、0.1%-0.2%氯化汞、10%次氯酸鈉、飽和漂白粉等進行實驗材料（liào）的滅（miè）菌;利用甲醛加高錳酸鉀[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀（jiǎ）)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加熱熏（xūn）蒸法（fǎ）進行無菌室和培養室的消毒。在使用時應注意安（ān）全，特別是用在皮膚或實驗材（cái）料上的消毒劑（jì），須選（xuǎn）用合適的藥劑種類、濃度和處理時間，才能達到安全和滅菌的目的。
6.抗生素（sù）抑菌法
  主要用（yòng）於培養液，是培養過程（chéng）中預（yù）防微生物（wù）汙染（rǎn）的重要手段（duàn）以及作為微生物汙染不嚴（yán）重時（shí）的“急救”措施。常（cháng）用的抗生素有青黴素、鏈黴素和新黴素（sù）等。
  二、不同種類（lèi）物品及培養物的（de）消毒滅菌方法
1.無（wú）菌操作室滅菌
  培（péi）養材料進（jìn）行培養、觀察（chá）或更換培養液時，必須從各方麵防止任何汙染物進（jìn）入培養液或容器，所以無菌操作室的滅（miè）菌是至（zhì）關重要的。由（yóu）於無菌（jun1）操（cāo）作室的汙染來源主要是空氣中（zhōng）的細菌（jun1）和真菌孢子，因此長期（qī）停用後的無（wú）菌操作室應進行熏蒸滅菌，熏蒸是用高錳（měng）酸鉀+甲醛[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]進行無菌室（shì）的滅菌（jun1）。經（jīng）常使用的無菌操作室，在每次使用前都應進行地麵衛生清（qīng）潔，並用紫（zǐ）外線燈照射30min，進行空氣滅菌。對超淨工作台，每次操作前用紫外（wài）燈照射30min，然後（hòu）用70%-75%酒精（jīng）擦拭。
2.培養液滅菌（jun1）
  培養液在製備過程（chéng）中帶有各種雜菌，分裝後應立即（jí）滅（miè）菌，或在24小時內完成滅菌工（gōng）序。目前常用過濾除菌法除去培養物操作液和培（péi）養液中的細菌。或對（duì）培養液中（zhōng）耐熱組分先進行高壓蒸汽滅菌，然後（hòu）在無菌室加入經過過濾除菌的（de）不耐熱溶液，混勻（yún）後分裝備用。
  使用高壓蒸汽滅菌器滅菌（jun1）時，將分（fèn）裝好的培養液放入（rù）底部有一定量(淹沒加熱管)涼（liáng）水的高（gāo）壓蒸汽滅菌器內，增壓至0.35~0.4 kg/cm2時排淨滅菌器內冷空氣，以便使（shǐ）蒸汽能到達各個消毒部位，保（bǎo）證消毒滅菌徹底。然後繼（jì）續加壓加熱，當壓力表讀數達到1.0~1.1 kg/cm2為121℃，保持（chí）15~20min即可。由於消毒滅菌效果取決於溫度而不是壓力，所以在一定壓力下（xià）保持（chí）較長（zhǎng）的消毒滅菌時間（jiān）是必須的。在121℃的蒸汽溫度（dù）下可以很快殺死各種（zhǒng）細菌及高度耐熱的芽孢杆菌，因此（cǐ）許多培養液的消（xiāo）毒（dú）滅菌壓力、溫度一般保持在1.0-1.1 kg/cm2、121℃。
  消（xiāo）毒滅（miè）菌時間與需要消毒滅菌的培養液量密切相關，時間不足達不到滅菌效果，時間過長培養液內的一些化（huà）學物質遭到破壞，影響培養液成分。消毒滅菌結束後（hòu），關閉熱源，隻有當滅（miè）菌器內壓力降為零時才能打開放氣（qì）閥，排除剩餘蒸汽，取出（chū）培養液。不可在壓力較高時打（dǎ）開放氣閥，引起減壓沸騰，使容器中液體溢出。培養液組成中如含有遇熱易分解的物質，則需用過濾方法消毒滅菌。首先對培養液中耐熱組分進（jìn）行高壓蒸汽滅菌後放置（zhì）在無菌（jun1）場所，固體培養液在40℃左（zuǒ）右瓊脂即將凝結前，加入經過過濾除菌的不耐熱溶液，混（hún）勻後冷卻備用。
  液體培養液在冷卻到（dào）室（shì）溫（wēn）後再加入過濾除菌（jun1）溶液。過濾除菌時，使用孔徑為0.22-0.45μm或（huò）更小的細菌濾膜。過濾除菌可利用抽濾裝置或注射過濾器進（jìn）行，所用器皿均應（yīng）進行高壓消毒（dú）滅菌，溫度不應超過121℃。
3.玻璃器皿、塑料器皿和器械滅菌（jun1）
  玻璃器皿可進行幹熱滅菌或高壓蒸汽滅菌，但在蒸汽（qì）滅菌後更好及時烘幹水分。對不能（néng）進行高壓蒸汽（qì）滅（miè）菌的塑（sù）料器皿可用75%酒精（jīng）浸（jìn）泡，使用前在無菌操作台（tái）麵上晾幹的同時，用紫外線重（chóng）複殺菌（jun1）。實驗室還可以用環氧乙烷滅菌袋對塑料器皿進行消（xiāo）毒（dú），消毒後的器皿要（yào）充分散氣2-4小時後才可使用。無（wú）菌操作所用的各種器械，一般采用幹（gàn）熱或高壓蒸汽滅菌，或用75%酒精浸泡，然後在無（wú）菌操作台麵上晾（liàng）幹的同時再用紫外線重複殺菌;在使用期間可多（duō）次對其進行酒（jiǔ）精燈火焰灼燒滅菌。
4.培養材料的消毒滅菌
  采自動物機體的實驗材（cái）料，攜帶著（zhe）微生（shēng）物及雜質，接種前須進行表麵（miàn）消毒滅菌，對內部已受微生物侵染的材料應予以淘汰。從動物機體采集的某（mǒu）些組織塊，須用（yòng）消毒劑進（jìn）行浸泡處（chù）理，進（jìn）行表麵消毒。常用（yòng）消毒劑有過氧化氫(10~12%，浸（jìn）泡（pào）5~15 min)、過氧乙酸(0.05%，浸泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。
  三、滅菌（jun1）程（chéng）序驗證內容
1、撰寫驗（yàn）證方案及製（zhì）定評估（gū）標準。
2、確認滅菌設備技術資料齊全、安裝正確，並能處於正常運行。
3、確認關鍵設備控（kòng）製儀表在規定的參數範圍內能正常運（yùn）行。
4、采用被（bèi）滅菌物品或模擬物品進行重複實驗確認滅菌效果符合（hé）規定。
5、完善文件記錄，撰寫驗證報告。
  四、滅菌程序運行監控
1、關鍵參數應在驗證確定的範圍內：溫度（dù）、壓力、時間、濕度、滅菌氣體濃（nóng）度、輻照劑量等。
2、滅菌程（chéng）序定期驗證，時效不（bú）超過半年。
3、滅（miè）菌設備（bèi）或程序發生變更重新進行驗證（zhèng）。
  五、滅菌保證
1、滅菌效（xiào）果與滅菌前產品汙染程度及汙染菌特性有關，把握微（wēi）生物汙染（rǎn）水平及汙染菌耐受性，注意各個環節降低汙染程度。
2、滅菌冷卻階段防（fáng）止已（yǐ）滅菌物品再（zài）次（cì）汙染。
3、適用（yòng）生（shēng）物指示（shì）劑、化學（xué）指示劑等監控滅菌結果
  生物指示劑
基本（běn）要求：
1、菌種的耐受性應大於需滅菌（jun1）產品中所有可能汙染菌的耐受性（xìng）。
2、菌種應無致病性。
3、菌株應穩定，存（cún）活期（qī）長，易於保存。
4、易於培養。若使用休眠孢子，孢子含量在90%以上（shàng）。
常用生物指示劑
1、濕熱滅菌：嗜熱脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
2、幹熱滅菌（jun1）：枯草芽孢（bāo）杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
3、輻射（shè）滅菌：短小芽孢（bāo）杆菌孢子（ATCC27142等（děng），活孢子數（shù）為5×107-5×108個/片)
4、氣體滅菌：
（1）環氧乙烷滅菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
  （2）氣態過氧化氫滅菌：嗜熱脂肪（fáng）芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢（bāo）子數為1×106-5×106個/片)

（3）過濾除菌法：缺陷假單胞（bāo）菌（ATCC19146等）。