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衡阳微生物实验室里的灭菌法你知道吗？

时间: 2021-12-09 10:05:32 来源: 湖南贝塔（tǎ）实（shí）验室设备有限公（gōng）司

微（wēi）生物实验室常（cháng）用的器材一般包括（kuò）玻璃器材（cái）、金属器械、橡胶制品及塑料制品等，每类器（qì）材的处理及消毒措施都有（yǒu）不同。严（yán）格的消毒灭菌工作极为重要，直接影响着整（zhěng）个实验能否顺利进行。下面（miàn）就和贝塔的小编一起来（lái）看（kàn）看微生物实验室有哪（nǎ）些消毒（dú）灭（miè）菌的方式吧（ba）！

一、消毒灭菌方法

目前，常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如，干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法（fǎ）等)和（hé）化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。

1.干热灭菌法
  是利用恒温干燥（zào）箱（xiāng）内120℃-150℃的高热，并保持90-120分钟，杀（shā）死细菌（jun1）和芽孢（bāo），达到（dào）灭菌目的的一种方法。主要适用于不（bú）便在压力（lì）蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不（bú）易被高温损（sǔn）坏的玻璃器皿（mǐn）、金属器械以（yǐ）及不能和蒸汽接触的物品的灭（miè）菌。用此方法灭（miè）菌的（de）物品干燥，易于贮存。酒精灯火焰烧灼灭（miè）菌法也是属于干（gàn）热灭菌的方法之（zhī）一（yī），在进行动物细胞体外培养工（gōng）作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌（jun1）。
2.湿热灭菌法
  压力蒸汽湿热灭菌法是目前朂常（cháng）用的一种灭菌（jun1）方法。它利用高压蒸（zhēng）汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而（ér）使微生物死亡。适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏（liú）水、棉塞、纸和某些培（péi）养液的灭菌。高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一般调整为（wéi）1.0-1.1 kg/cm2，维持20-30min即可达（dá）到灭菌效果。
3.射线灭菌法
  利用紫（zǐ）外（wài）线灯进行照射灭菌（jun1）的方法。紫外线（xiàn）是一种低（dī）能量（liàng）的电磁辐射，可以杀灭多种微生（shēng）物。紫外线的作用机制是通过对微生物的核（hé）酸及蛋白质（zhì）等的（de）破坏作用而（ér）使其灭活。适合于实验室空气、地面、操作台面灭（miè）菌。灭菌时（shí）间为30min。用紫外（wài）线杀菌时（shí）应注意，不能边照射边（biān）进行实验操作，因为紫外线不仅对人体皮（pí）肤有伤害，而且对（duì）培养物及一些试剂等也会产生不良影响。
4.过滤（lǜ）除菌法
  是将液体或气体通过有微孔的滤膜（mó）过滤（lǜ），使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除（chú）菌的方法。过滤除菌法大多用（yòng）于遇热易（yì）发生分解、变性而失效的试剂（jì）、酶液、血清、培养液等。
目前（qián），常用微孔滤膜金属（shǔ）滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细菌滤器（qì）、滤球负压过滤除菌。滤膜孔径应（yīng）在0.22-0.45μm范围内或用更小的细菌滤膜，溶液（yè）通过滤膜后，细菌和孢子等因大（dà）于滤膜孔径而被阻，并利用滤膜的吸附作用，阻制小于滤膜（mó）孔径的细菌透过。
5.化学消毒剂消毒法
  用于那些不能利用（yòng）物理（lǐ）方法进行灭菌的（de）物品、空气、工作面、操作者皮肤、某些实（shí）验器皿等。常用的化学消毒剂包括（kuò）甲醛、高锰（měng）酸钾、70%-75%乙醇、过氧乙酸、来苏尔水、0.1%新洁尔灭、环（huán）氧乙烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%-75%乙醇、0.1%-0.2%氯化汞、10%次氯酸（suān）钠（nà）、饱和（hé）漂白粉等进行实验材料的灭菌;利用甲醛加高锰酸钾[(2mL甲醛（quán）+1g高（gāo）锰酸钾)/m3]或乙（yǐ）二醇(6mL/m3)等加热熏蒸法进行无菌室和培养室的消毒。在使用时应注意安全，特别是用在皮肤或（huò）实验材料上的消毒剂，须选用合适的药剂种（zhǒng）类（lèi）、浓度和处理（lǐ）时间，才能达到（dào）安全和灭菌的目的。
6.抗生素抑菌法
  主要用于（yú）培养液（yè），是培养过程中预防微生物污染的重要手段以及作为微生物污染不（bú）严重时的“急救（jiù）”措施。常用的抗生素有（yǒu）青霉素、链霉素和新霉素等。
  二（èr）、不同种类物品及培养物的消毒灭菌方法
1.无菌操（cāo）作室灭菌
  培养材料进（jìn）行培养、观察或更换培养液时，必须从各方面防止（zhǐ）任何污染物进入培养液或容器，所以无（wú）菌操作（zuò）室的灭菌是至关重要的。由于无菌操作室的污染来源主要是空气中的细菌和真菌孢子，因此长期停用后的无菌（jun1）操作室应进行熏蒸灭菌，熏蒸是（shì）用高锰酸钾+甲醛[(2mL甲醛+1g高锰酸钾)/m3]进行无菌室的灭菌。经常使用的无菌操作室，在每次（cì）使用前都（dōu）应进行地面（miàn）卫（wèi）生（shēng）清洁，并（bìng）用紫外（wài）线灯照射30min，进行空气灭菌。对超净工作台，每次操作前（qián）用紫外灯照射30min，然后用70%-75%酒（jiǔ）精擦拭。
2.培养液灭菌
  培养液在制备过程（chéng）中带有各种杂菌，分装后应立即灭菌，或在24小时内完成灭菌工序。目前常用过滤除菌（jun1）法除去培养物操作（zuò）液和培（péi）养（yǎng）液（yè）中的细菌。或对（duì）培养液中耐（nài）热组分先进行高压蒸汽灭菌，然后在无菌室加入经过过滤除菌（jun1）的不耐热溶（róng）液（yè），混匀后分装备用。
  使用（yòng）高压蒸汽灭菌器灭菌时，将分装好的培养液放入底部有一（yī）定量(淹没加热管)凉水的高压蒸汽（qì）灭菌器内，增压至0.35~0.4 kg/cm2时（shí）排净灭菌器内（nèi）冷空气，以便使蒸汽能到达各个（gè）消毒部位（wèi），保证消（xiāo）毒灭菌彻底（dǐ）。然后（hòu）继续加压加热，当压力表读数达到1.0~1.1 kg/cm2为121℃，保持15~20min即（jí）可。由（yóu）于消毒灭菌效（xiào）果取决于温度而不是压力，所以在一定压力下（xià）保持（chí）较长的消毒灭菌（jun1）时间是（shì）必须的。在121℃的蒸汽温度下可以很快杀死各（gè）种细菌（jun1）及高（gāo）度耐热的芽孢杆菌，因此许多培养液的消毒灭菌压力（lì）、温度一般保持在1.0-1.1 kg/cm2、121℃。
  消（xiāo）毒灭菌时间与需要消毒灭（miè）菌的培养液量密切相关，时间不足达不到（dào）灭菌效果，时间过长培养液内的一些化学物质遭到破（pò）坏，影响（xiǎng）培养（yǎng）液成（chéng）分。消毒灭菌结束后，关闭热源，只有当灭菌器内压力降为零时才（cái）能（néng）打开放气阀，排除剩余蒸汽，取出培养液。不可（kě）在压力（lì）较高时打开放（fàng）气阀，引（yǐn）起减压沸腾，使容器中液体（tǐ）溢出。培养液组成中如含有遇热易分解的（de）物质（zhì），则需用过滤方法消（xiāo）毒灭菌。首先对培养液中耐热组分进行高压蒸汽灭菌后（hòu）放置（zhì）在无菌场所（suǒ），固体培养液在40℃左右琼脂即将凝结前（qián），加入经过过滤除菌的不耐热溶液，混匀后冷却备用。
  液体培养液在冷（lěng）却到室（shì）温后再加入过（guò）滤除菌溶液。过滤除菌时，使（shǐ）用孔径为0.22-0.45μm或更小的细（xì）菌滤膜。过滤除菌可利用抽（chōu）滤装置或注射过滤（lǜ）器（qì）进行，所用器皿均应进行高压消毒灭菌，温度不应超过121℃。
3.玻璃器皿、塑料（liào）器皿和器械灭菌
  玻璃器皿（mǐn）可进行干热灭菌（jun1）或高压蒸汽灭菌，但在蒸汽灭菌后更好及时烘干水分。对不能进行高（gāo）压蒸汽灭菌的塑料（liào）器皿可用75%酒精浸泡，使用前在无菌操作台面（miàn）上晾干的同时，用紫（zǐ）外线重复杀菌。实验室还可以用环氧乙烷灭菌袋对塑料器皿进（jìn）行消毒，消毒后的器皿（mǐn）要（yào）充分散气（qì）2-4小时后才可使（shǐ）用。无菌操（cāo）作所用的各（gè）种器械（xiè），一般（bān）采用干热或高压蒸（zhēng）汽灭菌，或（huò）用（yòng）75%酒精浸泡，然后在无菌操作台面上晾干的同时再用紫外线重复杀菌;在使用期间可多次对其（qí）进行酒精灯火（huǒ）焰灼烧灭菌。
4.培（péi）养材料的消毒灭菌
  采自动（dòng）物机（jī）体的实验材料，携带着微生物及杂质，接种前须进行表面消毒灭菌，对内部（bù）已受微生物侵染的材料应予以淘汰。从动物机（jī）体采集的某些（xiē）组织块，须（xū）用消毒剂进行浸泡处理，进行（háng）表面消毒。常用消毒剂有过（guò）氧化（huà）氢(10~12%，浸泡5~15 min)、过氧乙酸(0.05%，浸（jìn）泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。
  三、灭菌程序验证内容
1、撰写验证方案及制定评估标准。
2、确认灭菌设备技术资料齐全、安装正确，并能处于正常运行。
3、确认关键设备控制仪表在规定的参数范围内能正常运行。
4、采用被灭菌物品或模拟物品进（jìn）行重复实验（yàn）确认灭菌效果符合规定。
5、完善文件（jiàn）记录，撰（zhuàn）写验证报告（gào）。
  四、灭菌程（chéng）序运行监控
1、关（guān）键参数应在验证确定（dìng）的范围内：温度、压力、时间、湿度、灭（miè）菌气体（tǐ）浓度、辐照剂量等。
2、灭菌程序定期验证，时效不超过半年。
3、灭菌（jun1）设备或程序发生变更重新进行验证。
  五、灭菌保证
1、灭菌效果与灭菌前产品污染（rǎn）程度及污染菌特性有关，把握微生物污染水平及（jí）污染菌（jun1）耐受性，注意各个环节（jiē）降（jiàng）低污染程度。
2、灭菌冷却阶（jiē）段防止已灭菌物品再次污染。
3、适用生物指示剂、化学指示剂等监控灭菌结果
  生（shēng）物指示剂
基本要求：
1、菌种的耐（nài）受性应大于需灭菌产品中所有可能污染菌的耐受性。
2、菌种应无致病性。
3、菌株应稳（wěn）定，存活期长，易于保存。
4、易于培养。若使用休眠孢子，孢子含量（liàng）在90%以（yǐ）上。
常用生物指示剂
1、湿热灭（miè）菌：嗜热（rè）脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子数为（wéi）5×105-5×106个/片)
2、干热灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活（huó）孢子数为5×105-5×106个（gè）/片)
3、辐射（shè）灭菌：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子数为（wéi）5×107-5×108个/片)
4、气体灭菌：
（1）环氧乙烷灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等（děng），活孢子数（shù）为5×105-5×106个/片)
  （2）气态过氧化氢灭菌：嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子数为1×106-5×106个/片（piàn）)

（3）过滤除菌法：缺陷假单胞（bāo）菌（ATCC19146等（děng））。