湖南微生物實驗室裏的（de）滅菌法你知道嗎？-行業新聞-湖南貝塔實驗室設備有限公司

當前位置：網站首頁 > 新聞中心 > 行業新聞

行業（yè）新聞

目（mù）錄導航（háng）

熱門產品

湖南湖南（nán）實驗台-01

熱門新（xīn）聞

關鍵詞: 實驗室湖南微生物實驗室

湖南微生物實（shí）驗室裏的滅菌法你知道嗎？

時間: 2021-12-09 10:05:32 來源: 湖（hú）南貝塔實驗室設備有限公司

微（wēi）生物實驗室常用的器材一般包括玻璃器（qì）材、金（jīn）屬器械、橡膠製品及（jí）塑料製品等，每類器材的（de）處理及消毒措施都有不同。嚴格的消毒滅菌（jun1）工作極為重要，直接影響著整個實（shí）驗能（néng）否順（shùn）利進（jìn）行。下麵就和貝塔的小編（biān）一起來看看微生物（wù）實驗室（shì）有哪些消毒滅菌的方式吧！

一、消毒滅菌（jun1）方法

目前，常用的消毒滅（miè）菌方法多（duō）采用物理（lǐ）方法(如，幹熱滅菌法、濕熱滅菌法、過濾除菌法、射線殺菌法等)和化學方法(消毒劑、抗生（shēng）素)兩大類。

1.幹熱（rè）滅菌法
  是利用恒溫幹燥箱內120℃-150℃的高熱，並保持90-120分鍾，殺死（sǐ）細菌和（hé）芽孢，達到（dào）滅菌目的的一種方法。主要適用於不便在壓力蒸汽滅菌器中進行滅菌，且不易被（bèi）高溫損壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物（wù）品的滅菌。用此方法滅菌的物品幹（gàn）燥，易於貯存。酒精燈火焰燒灼滅菌法也是屬於（yú）幹熱滅（miè）菌（jun1）的方法之一，在進行動物細胞體外培養（yǎng）工作（zuò）時，常須利用工作台麵上的酒精燈火焰對金屬器具及玻璃器皿口緣進行補充滅菌（jun1）。
2.濕熱滅菌法
  壓力蒸汽濕熱滅菌法是目前朂常用的一種滅菌方（fāng）法。它利用高壓（yā）蒸汽以及在蒸汽環境中存在的潛熱作用和良好的穿透力，使菌體蛋（dàn）白質凝固變性而使（shǐ）微生物死亡。適合於（yú）布類工作衣、各種器（qì）皿、金屬器械、膠（jiāo）塞、蒸餾水、棉塞、紙和某些培養液（yè）的滅菌。高壓蒸汽滅菌器的（de）蒸汽壓力（lì）一般調整為1.0-1.1 kg/cm2，維（wéi）持（chí）20-30min即可達（dá）到滅（miè）菌效果。
3.射（shè）線（xiàn）滅菌法
  利用紫外線燈進行照射滅菌的方法。紫外線是一（yī）種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫外線（xiàn）的作用機製是通過對（duì）微生物的（de）核（hé）酸及蛋白質等的破壞作用而使其滅活。適合於實驗室空氣、地麵、操作台麵滅菌。滅菌時間為（wéi）30min。用紫外線殺菌時應注意，不能邊照射邊進行實驗操作，因為紫外線不僅對（duì）人體皮膚有傷害，而且對培養物及（jí）一些試劑等也會產生（shēng）不良影響。
4.過濾除菌法
  是將液體或氣體通過有微孔（kǒng）的（de）濾（lǜ）膜過濾，使大於濾膜（mó）孔徑的細菌等微生物顆粒阻留，從而達到除菌的方法。過濾除菌法大多用於遇熱易發（fā）生分解、變（biàn）性而失效的試劑、酶液（yè）、血清、培養液等。
目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正（zhèng）壓過（guò）濾除（chú）菌，或用玻璃細菌（jun1）濾器、濾球負壓過濾除菌。濾膜孔徑應在0.22-0.45μm範圍內或用更小的細菌濾（lǜ）膜，溶液通過濾膜後，細菌和孢子（zǐ）等因（yīn）大於濾膜孔徑而（ér）被阻（zǔ），並利用濾膜的吸（xī）附作（zuò）用（yòng），阻製小於濾膜孔徑的細菌透過。
5.化學消毒（dú）劑消毒法
  用於那些不（bú）能利用物（wù）理方法進行滅菌的物品、空氣、工作（zuò）麵、操作者皮膚、某些（xiē）實驗器皿等。常用（yòng）的化學消（xiāo）毒劑包括甲醛、高錳酸鉀（jiǎ）、70%-75%乙醇、過（guò）氧（yǎng）乙酸、來蘇爾水（shuǐ）、0.1%新潔爾滅、環氧乙（yǐ）烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%-75%乙醇、0.1%-0.2%氯化汞、10%次氯酸鈉、飽和漂白粉等進行實驗材料的滅菌;利（lì）用甲醛加高錳酸鉀[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀（jiǎ）)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加（jiā）熱熏蒸法進（jìn）行無菌室（shì）和（hé）培養室的消毒。在使用（yòng）時應注意安全，特別是用在皮（pí）膚或實驗材料（liào）上的消毒劑（jì），須選用合適（shì）的藥劑種類、濃（nóng）度和處理時間，才能達到安全和滅菌的目的。
6.抗生素抑菌法
  主要（yào）用於培養液，是培養過程中預防微生物汙染的重要手段以及作為微生物汙染不嚴重（chóng）時（shí）的“急（jí）救”措施。常用（yòng）的抗生素有青黴素、鏈黴素和新黴素等。
  二、不同種類物（wù）品及培養（yǎng）物的消毒滅菌方（fāng）法
1.無菌操作（zuò）室滅菌
  培養材料進行培養（yǎng）、觀察或更（gèng）換（huàn）培養液時，必須從各方麵防止任何汙染物進入（rù）培養液或容器，所（suǒ）以無菌操作室的滅（miè）菌是至關重（chóng）要的。由於無菌操作室的汙染來源主要是空氣中的細菌和真菌孢子（zǐ），因此長期（qī）停用後的（de）無菌操（cāo）作室應進行（háng）熏蒸滅菌，熏蒸是（shì）用高錳酸（suān）鉀+甲醛[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]進行無菌室的滅菌。經（jīng）常使用的無菌操作室，在每次使用前都應進行地麵衛生（shēng）清潔，並用紫外線燈照射30min，進行空氣（qì）滅菌。對超淨工作台（tái），每次（cì）操作前用紫外燈照射30min，然後用70%-75%酒精擦拭。
2.培養（yǎng）液滅菌
  培養（yǎng）液在製備過程中帶有各種雜菌（jun1），分裝後應立即滅（miè）菌，或在24小時內完（wán）成滅菌工序。目前常用過濾除菌法除去培養物（wù）操作液和培養液中的細菌。或對培養液中耐（nài）熱組分先進（jìn）行高壓蒸汽滅菌，然後在無菌（jun1）室加入經過過濾除菌的不耐（nài）熱溶液，混勻後分裝備用。
  使用高壓（yā）蒸汽滅菌器（qì）滅菌時，將分裝（zhuāng）好的培養液放入底部有（yǒu）一（yī）定量(淹沒加熱管)涼水的高壓蒸汽滅菌器內，增壓至0.35~0.4 kg/cm2時（shí）排淨滅（miè）菌器內冷空氣（qì），以便使蒸汽（qì）能（néng）到達各（gè）個消毒（dú）部位，保證消毒（dú）滅菌徹底。然後繼續加壓加熱，當壓力表（biǎo）讀數達到1.0~1.1 kg/cm2為121℃，保持15~20min即可。由於消毒滅菌效果取決於溫度而不是壓力，所以在一定壓力下保持較長的消毒滅菌時間是必須的。在121℃的蒸汽溫度下可以很（hěn）快殺死各種細菌及高度耐熱的芽孢杆菌，因此許（xǔ）多培養液的消毒滅菌壓力、溫度一般保持在1.0-1.1 kg/cm2、121℃。
  消毒（dú）滅菌時間與需要消毒滅菌的培養液量密（mì）切相關，時間不足達不到滅菌效果，時間過長培養液內的一些化學物質遭到破壞，影響培養液成（chéng）分。消毒滅菌結束後（hòu），關（guān）閉熱源，隻有當滅菌器（qì）內壓力降為零時才能打開放氣閥，排除剩（shèng）餘（yú）蒸（zhēng）汽，取出培養液。不可在壓力較高時（shí）打開放氣閥，引起減壓沸騰（téng），使容器中液體溢出。培養液組成中如含有遇熱易分解的物質，則需用過濾方法消毒滅菌（jun1）。首（shǒu）先對培養液中耐熱組分進（jìn）行高壓蒸汽滅菌（jun1）後放置在無菌場所，固體培養液在40℃左（zuǒ）右瓊脂即將凝結前，加入（rù）經過過濾除菌的（de）不耐熱溶液，混勻後冷（lěng）卻備用。
  液體培（péi）養液在冷卻到室溫後再加入過濾除菌溶液。過濾除（chú）菌（jun1）時，使用孔徑為0.22-0.45μm或更小的細菌濾膜。過濾除菌可利用抽（chōu）濾裝置或注射過濾器進行，所用器皿均應進行高壓消毒滅菌，溫度不應（yīng）超過121℃。
3.玻璃器皿（mǐn）、塑料器皿和器（qì）械滅菌（jun1）
  玻璃器皿可（kě）進行幹熱滅菌或高壓蒸汽滅菌，但在蒸汽滅菌後更好及時烘幹水分。對不能進行高壓蒸汽滅菌的塑料器皿可用75%酒精浸（jìn）泡，使用前（qián）在無菌操（cāo）作台麵上晾幹（gàn）的同時，用紫外線重複殺菌。實（shí）驗室還可以用環氧乙烷滅菌袋對塑料（liào）器皿進行消（xiāo）毒，消毒後的器（qì）皿要充分散氣2-4小時後才可使用。無菌操作所用（yòng）的各種（zhǒng）器械（xiè），一般采用幹熱或高壓蒸汽滅菌，或用75%酒精浸（jìn）泡，然後（hòu）在無（wú）菌操作台麵上晾幹的同時再用紫外線重複殺菌;在使用期間可多次對其進行酒精燈火焰灼燒滅菌。
4.培養材料的消（xiāo）毒滅菌
  采自動物機體的實驗材料，攜帶著（zhe）微生物及雜質，接種前須進（jìn）行表麵消毒滅菌，對內（nèi）部已受微生物侵染的材料應予以淘汰。從動物機體采集的某些組織（zhī）塊，須用消毒劑進行浸泡（pào）處理，進行表麵消毒。常（cháng）用消毒劑有過氧（yǎng）化氫(10~12%，浸泡5~15 min)、過氧乙酸(0.05%，浸泡30s~1min)、酒（jiǔ）精(70~75%，浸泡2 min)。
  三、滅菌程序驗證內容
1、撰寫驗證方案及製（zhì）定評估標準。
2、確認滅菌（jun1）設（shè）備技術資料齊全、安裝正確，並能處於正常運行。
3、確認關鍵設備控製儀表在規定的參數範圍內能正常運行。
4、采用被滅菌物品（pǐn）或模擬物品進行重複實驗（yàn）確認滅菌效果符合規定。
5、完善文件記錄，撰寫驗證報告。
  四、滅菌程序運行監控
1、關鍵參數應在驗證確定（dìng）的範圍內：溫（wēn）度、壓力、時間、濕度（dù）、滅菌氣體濃度、輻照劑量等。
2、滅菌程序定期驗（yàn）證，時效（xiào）不（bú）超（chāo）過半年。
3、滅（miè）菌設備或程序發生變更（gèng）重新進行驗證。
  五、滅菌保證（zhèng）
1、滅菌效果與滅菌前產（chǎn）品汙染程度及汙染菌特性有（yǒu）關，把握微生物汙（wū）染（rǎn）水（shuǐ）平及汙染菌耐受性，注意各個環節降低汙染程度。
2、滅菌冷卻階段防止已滅菌物（wù）品再次汙染。
3、適用生物指示劑、化學指示劑等監控滅菌結果
  生（shēng）物指示劑
基本要求：
1、菌種的耐（nài）受性（xìng）應大於需滅菌產品（pǐn）中所有可能汙（wū）染菌（jun1）的耐受性。
2、菌種應無致病性（xìng）。
3、菌株應穩定，存（cún）活期長（zhǎng），易於（yú）保存。
4、易於培養。若使用（yòng）休眠孢（bāo）子，孢（bāo）子含量在90%以上（shàng）。
常用生物指示劑
1、濕熱滅菌：嗜熱（rè）脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
2、幹熱滅菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105-5×106個（gè）/片)
3、輻射（shè）滅菌：短小芽孢杆菌孢（bāo）子（ATCC27142等，活孢子數為5×107-5×108個/片)
4、氣體滅菌：
（1）環氧乙烷滅菌：枯草芽孢杆菌孢（bāo）子（ATCC9372等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
  （2）氣態過氧化氫滅菌：嗜熱脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子數為1×106-5×106個/片)

（3）過濾除菌法（fǎ）：缺陷假單胞（bāo）菌（ATCC19146等）。