婁底微生物實驗室裏（lǐ）的滅菌法你知道嗎？-行業新聞-湖南貝塔實驗室設備有限公司

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婁底微生物實（shí）驗室裏的滅菌法你知（zhī）道嗎？

時間: 2021-12-09 10:05:32 來源: 湖南貝塔實（shí）驗室設備有限公司

微生（shēng）物實驗室常用的器材一般包括玻璃器（qì）材、金屬器械（xiè）、橡膠製品及塑（sù）料製品等（děng），每類器材的處理及消毒措施都有不（bú）同。嚴格的消（xiāo）毒滅菌工作極為重要，直接影響著整（zhěng）個實驗能否順利進行。下麵就和貝塔的小編（biān）一（yī）起來看看微生物實驗室有哪些消毒滅菌的方式吧！

一（yī）、消毒滅菌方（fāng）法

目前，常用的消毒滅菌（jun1）方法多采用物理方法(如（rú），幹熱滅菌法、濕熱滅（miè）菌法、過濾除菌法、射線殺菌法等)和化學方法(消毒劑、抗生素)兩大（dà）類。

1.幹熱滅菌法
  是（shì）利用恒溫幹燥箱內120℃-150℃的高熱，並保持90-120分鍾，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的的（de）一（yī）種方法。主（zhǔ）要適用於不便在壓力蒸汽滅菌（jun1）器中進（jìn）行滅菌，且不易被高溫損壞的玻璃器皿、金屬（shǔ）器械以（yǐ）及不能和蒸汽接觸的物品的滅菌。用此方法（fǎ）滅菌（jun1）的物品幹燥，易於貯存。酒精燈火焰（yàn）燒灼滅菌法也是屬（shǔ）於（yú）幹熱滅菌的方法之一，在進行動物（wù）細胞體外培養工作時，常須利（lì）用工作台麵上的酒精（jīng）燈火（huǒ）焰對金屬器具及玻璃器皿口（kǒu）緣進行補充滅菌。
2.濕熱滅菌（jun1）法
  壓力蒸汽濕熱滅菌法是目前朂常用的一（yī）種滅（miè）菌方（fāng）法。它利用高壓蒸汽以及在蒸汽環境中存在的潛熱（rè）作用和（hé）良好的穿透力，使菌體蛋（dàn）白質凝固變性而使微生物死亡。適合於布類（lèi）工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸餾水、棉塞、紙和（hé）某些培養液的滅菌（jun1）。高壓蒸汽滅菌器的蒸汽壓力一般調整為1.0-1.1 kg/cm2，維持20-30min即可達（dá）到滅菌效果（guǒ）。
3.射線滅菌法
  利用紫外線燈進行照射滅菌的方法。紫外線是一（yī）種（zhǒng）低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫外線的作（zuò）用機製是通（tōng）過對微生物的核酸及蛋白質等的破壞作用而使（shǐ）其滅活。適合於（yú）實驗室空氣、地麵、操作台麵滅菌。滅菌時（shí）間為30min。用紫外線殺菌時應注意，不能邊照射邊進行實驗操作，因（yīn）為紫外線不僅對人體皮膚有傷害，而且對培養物及一些試劑等也會產生不良影（yǐng）響。
4.過濾除（chú）菌法
  是將液（yè）體或氣體通（tōng）過有微孔的濾膜過濾，使大於濾膜孔徑的（de）細菌等（děng）微生物（wù）顆粒阻（zǔ）留（liú），從而達到（dào）除菌的（de）方法。過濾除菌法大多用於遇熱易發生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養液等。
目前，常用微孔濾膜（mó）金屬濾器或塑料濾（lǜ）器正壓過濾除菌，或（huò）用玻璃細菌濾器、濾（lǜ）球負壓過濾除（chú）菌。濾膜孔徑應在（zài）0.22-0.45μm範圍內或用更小的細菌濾膜，溶液通過濾膜後，細菌和孢子等（děng）因大於濾膜孔徑而被阻，並利用濾膜（mó）的吸附作（zuò）用，阻製小於濾膜孔徑（jìng）的細菌透過。
5.化學消毒（dú）劑消毒法
  用於（yú）那些不能利用物理方（fāng）法（fǎ）進行滅菌的物品、空氣、工（gōng）作（zuò）麵、操作者皮（pí）膚、某些（xiē）實驗器皿等。常用的化（huà）學消毒劑包（bāo）括（kuò）甲醛、高錳（měng）酸鉀、70%-75%乙醇（chún）、過氧乙酸、來蘇（sū）爾水、0.1%新潔爾滅、環氧乙烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%-75%乙醇、0.1%-0.2%氯化汞、10%次氯酸鈉、飽（bǎo）和漂（piāo）白粉等（děng）進行實驗材料的滅菌（jun1）;利用甲醛（quán）加高錳酸鉀[(2mL甲醛（quán）+1g高錳酸鉀)/m3]或乙二醇（chún）(6mL/m3)等加熱熏蒸法進行無（wú）菌室和培養室的消（xiāo）毒。在使用時應注意安全，特別（bié）是用在皮膚或實驗材料上的（de）消毒劑，須選用合適的藥劑種類（lèi）、濃度和處理時間，才能達到安全和滅菌的目的。
6.抗生素抑菌法
  主要用（yòng）於（yú）培養液（yè），是培養過程中預防微生物汙染的重要手段以及作為微生物汙染不嚴重時的“急救”措施。常用（yòng）的抗生素（sù）有青黴素、鏈黴素和新（xīn）黴素（sù）等。
  二、不同種類物品及培養物的消（xiāo）毒滅菌方法
1.無菌操作室（shì）滅菌
  培養材料進行培養、觀察或更換培養液時（shí），必須從各方麵防止任何汙染物進入培（péi）養液或容器（qì），所以無菌操作室的（de）滅菌是至關重要的。由於無菌操作（zuò）室的汙染（rǎn）來（lái）源主要是空氣中的細菌和真菌孢子，因此長期停用後的無菌操作室應進行熏蒸滅（miè）菌，熏蒸是用高（gāo）錳（měng）酸鉀+甲醛[(2mL甲醛+1g高錳酸（suān）鉀（jiǎ）)/m3]進（jìn）行無菌室的滅菌。經常使用的無菌操作室，在每次使用前都應進行地麵衛生清潔，並（bìng）用紫外線燈照射30min，進行空氣滅菌。對超淨工作（zuò）台，每次操作前用紫外燈照射30min，然後用70%-75%酒精擦拭。
2.培養液滅菌
  培養液在製備過（guò）程中帶有各種雜菌，分（fèn）裝後應立即滅菌，或在24小時內完成滅菌工序。目前常用過濾除菌法除去培養物操作液和培養液中的細菌。或（huò）對培（péi）養液中耐熱組分先進行高壓蒸汽滅菌，然後（hòu）在無菌室加入經（jīng）過過濾除菌的不耐（nài）熱溶液，混勻後分裝備用。
  使用高壓（yā）蒸汽滅（miè）菌（jun1）器滅菌時，將分裝好的培養液放入底部有一定量(淹（yān）沒加熱管)涼水的高（gāo）壓蒸汽滅菌器內，增壓至0.35~0.4 kg/cm2時排淨滅菌器內冷空氣（qì），以便使蒸（zhēng）汽能到達（dá）各個消毒部位，保證消（xiāo）毒滅菌徹底。然後繼續加壓加熱，當壓力表讀數達到1.0~1.1 kg/cm2為121℃，保持15~20min即可。由於消毒滅菌（jun1）效果取決（jué）於（yú）溫度而不是壓（yā）力，所以在一定壓力下保持較長的消毒滅菌（jun1）時間（jiān）是必須的。在（zài）121℃的蒸（zhēng）汽溫度下可以很快殺死各種細菌及高度耐熱的芽孢杆菌，因此許多培養液的消毒滅菌壓力、溫度一般保持在1.0-1.1 kg/cm2、121℃。
  消毒滅菌時間與需要消毒滅菌的（de）培養液量密切相關，時（shí）間不足達不到滅菌效（xiào）果，時間過長培養液內（nèi）的一些化學物質（zhì）遭（zāo）到破壞，影響培養液成分。消毒滅（miè）菌結束後，關閉熱源（yuán），隻有當（dāng）滅菌器內壓力降為零時才（cái）能打開放氣閥，排除剩餘蒸汽（qì），取出培養液。不可在壓（yā）力較高時打開放氣閥，引起減壓沸騰，使容器中液體溢出。培養液組成中如含有遇熱（rè）易分解的物質，則需用過濾方法消毒滅菌（jun1）。首先對培養液中耐熱組分進行高壓蒸汽滅菌後放置在無菌場所，固（gù）體培養液在（zài）40℃左右瓊（qióng）脂即（jí）將凝結前，加入經過過濾除菌的不耐熱溶液，混勻後冷卻備用。
  液體培養液（yè）在冷卻到室溫後再加入過（guò）濾除菌溶液。過濾除菌時，使用孔徑為0.22-0.45μm或更小的細菌濾膜。過濾除菌可利用抽濾裝置或注射過濾器（qì）進行，所用器皿均應進行高（gāo）壓消毒滅菌，溫度不應超過（guò）121℃。
3.玻璃器皿、塑料器皿和器械滅菌
  玻璃器皿可進行幹熱滅菌或高壓蒸汽滅（miè）菌，但在蒸汽（qì）滅菌後更好及時烘幹水分。對不（bú）能進行高壓蒸汽滅菌的塑料器皿可（kě）用75%酒精（jīng）浸泡，使用前在無菌操作台麵上晾幹的同時（shí），用紫外線重複殺菌。實驗室還（hái）可以用環氧乙烷滅菌（jun1）袋對塑（sù）料器皿進行消毒，消（xiāo）毒後的器皿（mǐn）要充分（fèn）散氣2-4小時後才可使用。無（wú）菌（jun1）操作所用的各（gè）種器械，一般采用幹熱或高壓蒸汽滅菌，或用75%酒精浸泡，然後在無（wú）菌操作台麵上晾（liàng）幹的同時再用（yòng）紫外線重複殺菌;在使用期間可多次對其進行酒精燈（dēng）火焰灼燒滅菌。
4.培養材料的消毒滅菌
  采自動物機體的實（shí）驗材料，攜帶（dài）著微生物及雜質，接種前須進行表麵消毒滅菌，對內部已受微生物侵（qīn）染的材料應予以淘汰。從動物機體采集的某些組織塊，須用消毒劑進行浸（jìn）泡處理，進行表麵消毒。常用消毒劑有過氧化氫(10~12%，浸泡（pào）5~15 min)、過氧乙酸(0.05%，浸泡（pào）30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡（pào）2 min)。
  三、滅菌程序驗（yàn）證內容
1、撰寫驗（yàn）證（zhèng）方案及製定（dìng）評估標準。
2、確認滅菌設備技術資料齊全、安裝正確，並能處於正常運行（háng）。
3、確認關鍵設備控製儀表在規定的參數範圍內能正常運行。
4、采用被滅菌物（wù）品或模擬物品進行重複實驗確認滅菌效果符合（hé）規定。
5、完善文件記錄，撰寫驗證報告。
  四、滅菌程（chéng）序運行監控
1、關鍵參數應在驗證確定的範圍內：溫度、壓力、時間、濕度、滅菌氣體濃度、輻照（zhào）劑量等。
2、滅（miè）菌程序定期驗（yàn）證，時效不超過半年。
3、滅菌設備或程序發生變更重新進行驗證。
  五、滅菌保證
1、滅菌效果與滅（miè）菌前產品汙（wū）染程度及汙染菌特性有（yǒu）關，把握微生物汙染水平及汙染菌耐（nài）受性，注（zhù）意各個環節降低汙染程度。
2、滅菌冷卻階段防止已滅菌物品再次汙染。
3、適用生物指示劑、化學指（zhǐ）示劑（jì）等監控滅（miè）菌（jun1）結（jié）果
  生物指（zhǐ）示劑（jì）
基本要（yào）求：
1、菌種（zhǒng）的耐受性應大於需滅菌產品（pǐn）中（zhōng）所有可能汙染菌的耐受性。
2、菌種應無致病性。
3、菌株應（yīng）穩定，存活期長（zhǎng），易於保存（cún）。
4、易於培養。若使用休眠孢（bāo）子，孢子含量在90%以上。
常用生物指示劑
1、濕熱滅菌：嗜熱脂肪芽孢杆菌孢子（zǐ）（ATCC7953等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
2、幹熱滅菌：枯草芽孢杆（gǎn）菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
3、輻射滅菌：短小芽孢杆菌孢（bāo）子（ATCC27142等，活孢子數為5×107-5×108個/片)
4、氣體滅菌：
（1）環氧乙烷滅菌：枯草芽孢杆菌（jun1）孢子（ATCC9372等，活（huó）孢（bāo）子數為5×105-5×106個（gè）/片)
  （2）氣（qì）態過氧化氫滅（miè）菌：嗜熱（rè）脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活（huó）孢子數為1×106-5×106個/片)

（3）過濾除菌法：缺陷假單胞菌（ATCC19146等）。