汨羅微生物實驗（yàn）室（shì）裏的（de）滅菌法你知道嗎？-行業新聞-湖南貝塔實驗室設備有限公司（sī）

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關鍵（jiàn）詞: 實驗室湖南微（wēi）生物實驗室

汨（mì）羅微生物實驗室裏的滅菌法（fǎ）你知道嗎？

時間: 2021-12-09 10:05:32 來源: 湖南（nán）貝塔實驗室設備有限公司

微（wēi）生（shēng）物實驗室常用的器材一般包（bāo）括玻璃器材、金屬器械、橡膠（jiāo）製品及塑料製品等，每（měi）類器材（cái）的處理及消（xiāo）毒措施都有不同。嚴格的消毒滅菌工作（zuò）極為重要，直接（jiē）影響（xiǎng）著整個實驗能否順利進行。下麵就和貝塔的小編（biān）一起來看看微生物實驗室有（yǒu）哪些消毒滅（miè）菌的（de）方式吧！

一、消毒（dú）滅菌方法

目前，常用的消毒滅菌方法多采用物理方法（fǎ）(如，幹熱滅菌法（fǎ）、濕熱滅菌法、過濾除菌法（fǎ）、射線（xiàn）殺菌法等)和（hé）化學方法(消毒劑、抗（kàng）生素（sù）)兩大類。

1.幹熱滅菌（jun1）法
  是利用恒溫幹燥箱內120℃-150℃的（de）高（gāo）熱，並保持（chí）90-120分鍾，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的的一種方法。主要適用於不便在壓力蒸汽滅菌器中進（jìn）行滅菌，且不易被高（gāo）溫（wēn）損（sǔn）壞（huài）的玻璃器皿、金屬器械（xiè）以及（jí）不能和蒸汽接觸的物品的滅菌。用此方法滅（miè）菌的物品幹燥，易於貯存。酒精燈火焰燒灼滅菌法也是屬（shǔ）於幹熱滅菌的（de）方法之（zhī）一，在進行動物細胞體外（wài）培養工作時，常須利用工作台麵上的酒精燈（dēng）火焰對金屬器具及玻（bō）璃器皿口緣進行補充滅菌（jun1）。
2.濕熱滅（miè）菌法
  壓力蒸汽濕熱滅菌法是目前朂（xù）常用（yòng）的一種（zhǒng）滅菌方法。它利用高壓蒸汽以及在蒸汽環境中存在的潛熱作用和良好（hǎo）的穿透力，使菌體蛋白質凝固變性而使微生物死亡。適合（hé）於布（bù）類工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸餾水、棉塞、紙和某些培養液的滅菌。高壓蒸汽滅菌（jun1）器的蒸汽壓力一般調整為1.0-1.1 kg/cm2，維持20-30min即可達到（dào）滅菌效果。
3.射（shè）線滅菌法
  利（lì）用紫外線燈進行照射滅菌的方法。紫外線是一種低能量的（de）電磁輻射（shè），可以殺滅（miè）多（duō）種微生物。紫外線的作用機（jī）製是通過對微生物的核酸及蛋白質等的破壞作用而使其滅（miè）活。適合於實（shí）驗（yàn）室空氣、地麵、操作台（tái）麵滅菌。滅菌時間為30min。用紫外線殺菌時應注（zhù）意，不能邊照射邊進行實驗操（cāo）作，因為紫外線不僅對人體皮膚有傷害，而且對培養物及一些試劑等也會產生不良影（yǐng）響。
4.過濾除菌（jun1）法
  是將液（yè）體或氣體通過（guò）有微孔的（de）濾（lǜ）膜過濾，使大於濾膜（mó）孔徑的細菌等微生物顆粒阻留，從而達到除菌的方法。過濾除（chú）菌法大多用於遇熱易發（fā）生分解、變性而（ér）失效的試劑、酶液、血清（qīng）、培養液等。
目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器（qì）正壓過濾除菌，或用玻璃細菌濾器、濾球負壓過濾除菌。濾膜孔徑應在0.22-0.45μm範圍內（nèi）或用更小的細菌濾膜，溶液通過濾膜後（hòu），細菌和孢子等因大於濾膜孔徑而被阻，並利用濾（lǜ）膜（mó）的吸附作用，阻製小（xiǎo）於濾（lǜ）膜孔徑的細菌透過。
5.化學消毒（dú）劑消毒（dú）法
  用於（yú）那些不能利用物理方（fāng）法進（jìn）行滅菌的物品、空氣、工作麵、操作者皮膚（fū）、某些實驗器皿等（děng）。常用的化學消毒劑包括甲醛（quán）、高錳酸（suān）鉀（jiǎ）、70%-75%乙醇、過（guò）氧乙酸、來蘇爾水、0.1%新潔（jié）爾滅、環（huán）氧乙烷、碘伏或碘酊（dǐng）等。其中利用70%-75%乙醇、0.1%-0.2%氯化汞（gǒng）、10%次氯酸鈉、飽和漂白粉等進行實驗材料的滅菌;利用甲醛加（jiā）高（gāo）錳酸鉀[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]或乙二醇（chún）(6mL/m3)等加熱熏蒸法進行無菌室（shì）和培（péi）養（yǎng）室的消毒（dú）。在使用時應注意安（ān）全，特別是用在皮（pí）膚或實驗材料上的消毒劑，須選用合適的藥劑種類、濃（nóng）度和處理時間，才能達到（dào）安全和滅菌的（de）目的。
6.抗生素（sù）抑菌法
  主要用於培養液，是培養過程中預防微生物汙染（rǎn）的重要手段以及作為微生物汙染不嚴重時的“急救”措施。常用的抗生素有（yǒu）青（qīng）黴素（sù）、鏈黴素和新黴素等。
  二（èr）、不同（tóng）種類（lèi）物（wù）品及培養物的消毒滅菌方法
1.無菌操作室滅菌
  培養材料進行培養（yǎng）、觀察或更換（huàn）培養液時，必須從各方麵防止任何汙染物進入培養液或容器，所以無菌操作室的滅菌（jun1）是至關重要的（de）。由於無菌操作室的汙染來源主要是空氣中的細菌和真菌孢子，因此長期停用後的（de）無菌（jun1）操作室應進行（háng）熏蒸滅菌（jun1），熏蒸是用高錳酸鉀+甲醛[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]進行無菌（jun1）室的滅菌（jun1）。經常使用（yòng）的（de）無菌（jun1）操作室，在每次使用前都應進行地麵衛生清潔，並用紫外線燈照射30min，進行空氣滅菌。對超淨工（gōng）作（zuò）台，每次操作前用紫外燈照射30min，然後用70%-75%酒精擦拭。
2.培養液滅（miè）菌
  培養液在製備過程中帶有各種雜（zá）菌，分裝後（hòu）應（yīng）立即滅菌，或在24小時內完成滅菌工序。目前常用過濾除菌法除去培養物操作液和培養液中的細菌（jun1）。或對培養液中耐熱組分先進行高壓蒸汽滅菌，然後在無菌室加入經過過濾除菌的不耐熱溶液（yè），混勻後分裝備用。
  使（shǐ）用高壓蒸汽滅菌器滅菌時（shí），將分裝好的培養液放（fàng）入底部有一定量(淹沒（méi）加熱管)涼水的高（gāo）壓蒸汽滅菌器內，增壓至0.35~0.4 kg/cm2時排淨（jìng）滅（miè）菌器內冷空氣，以便使蒸汽能到達各個消毒部位，保證消毒滅菌徹底。然後繼續（xù）加壓加熱（rè），當壓力（lì）表讀數達到1.0~1.1 kg/cm2為121℃，保持15~20min即可。由於消（xiāo）毒滅菌效果取決於溫度而不是壓力，所以在一定壓（yā）力下保持較長的消（xiāo）毒滅菌時間是必須的。在121℃的（de）蒸（zhēng）汽溫度下可以很快殺死（sǐ）各種細菌及高度耐熱的芽孢杆菌，因此許多培養（yǎng）液的消毒滅菌壓力、溫度一般保持在1.0-1.1 kg/cm2、121℃。
  消毒滅（miè）菌時間與需要消毒滅菌的培養液量密切相關，時間不足達不到滅（miè）菌效果（guǒ），時間過長培養液內的一些化學物質遭到（dào）破（pò）壞，影響培養液成（chéng）分。消毒滅菌結束後，關閉熱源（yuán），隻有當滅菌器內（nèi）壓（yā）力降為零時才能（néng）打開放氣閥，排除剩餘蒸汽，取出培養液。不可在壓力較高時打開放氣閥，引起減壓沸騰，使容器中液體溢出。培養液組成中如（rú）含有（yǒu）遇熱易分解的物（wù）質（zhì），則需用過濾方（fāng）法消毒滅菌。首先對培養液中耐熱組分進（jìn）行高壓蒸汽滅菌後放置在無（wú）菌（jun1）場所，固體培養液在（zài）40℃左右瓊脂即將凝結前，加入經過（guò）過濾除菌的不耐熱溶液，混勻（yún）後冷卻備用。
  液體培養液在冷卻（què）到室（shì）溫後再加入過濾（lǜ）除菌溶液。過濾（lǜ）除菌時，使用孔徑為0.22-0.45μm或更小的細菌濾膜。過濾除（chú）菌可利用抽濾裝置或注射過濾（lǜ）器進行，所用（yòng）器皿均應進行高壓消毒滅菌，溫度不應超過121℃。
3.玻璃器（qì）皿、塑料器皿和器械滅菌
  玻璃器皿可進行幹熱滅菌或（huò）高壓蒸汽滅菌，但在蒸汽滅菌後更好及時烘幹水分（fèn）。對不能進行高（gāo）壓蒸汽滅（miè）菌的塑料（liào）器皿可用75%酒精（jīng）浸泡（pào），使用前在無菌操作台麵上晾（liàng）幹的同時，用（yòng）紫外線重複殺菌。實驗室還可以用環氧（yǎng）乙烷滅菌（jun1）袋對塑料器皿進（jìn）行消毒，消毒後（hòu）的器皿要充分散氣2-4小時後才可使用。無菌（jun1）操作所用的各種器械（xiè），一般采用幹熱或高壓蒸汽滅菌（jun1），或用75%酒精浸泡，然後在無菌操作台麵上晾（liàng）幹的（de）同時（shí）再用（yòng）紫外線重複殺菌;在使用期間（jiān）可多次（cì）對（duì）其進行酒精燈火焰灼燒滅菌。
4.培養材料（liào）的消毒（dú）滅菌
  采自動物機體的實驗（yàn）材料，攜帶著微生物及雜質，接種前須（xū）進行表麵消毒（dú）滅菌（jun1），對內部已受微生物侵染的材料應予以淘汰。從動物機體采集的某些組織（zhī）塊，須用消毒劑進行浸泡處（chù）理，進行表麵消毒（dú）。常用（yòng）消毒劑有（yǒu）過氧化氫(10~12%，浸泡5~15 min)、過氧乙酸(0.05%，浸泡（pào）30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。
  三、滅菌（jun1）程序驗證內（nèi）容
1、撰（zhuàn）寫驗證方（fāng）案及製（zhì）定評估標準。
2、確認滅菌設（shè）備技術資（zī）料齊全、安裝（zhuāng）正確，並（bìng）能處於正常運行。
3、確認關鍵（jiàn）設備控製儀表（biǎo）在（zài）規定的參數範圍內能正常運行。
4、采用被（bèi）滅菌物品或模擬物品進（jìn）行重複實驗確認滅菌效果符合規定。
5、完善文件記錄，撰寫驗證報告。
  四、滅菌程序運行監控
1、關鍵參數應（yīng）在驗證確定的範圍內：溫度、壓力、時（shí）間、濕度、滅菌氣（qì）體濃度、輻照劑量等。
2、滅菌程序定期驗證（zhèng），時效（xiào）不超過半年。
3、滅菌設備或程序發生變更重新進行（háng）驗證（zhèng）。
  五、滅菌保證
1、滅菌效果與滅菌前產品汙染程度及汙（wū）染菌特（tè）性有關，把握（wò）微生物汙染水平及汙染菌耐受性，注意各（gè）個（gè）環節降低汙染程度。
2、滅菌冷卻階段防止已滅菌物品再次汙染。
3、適用生物（wù）指示劑、化學指示（shì）劑等監控滅菌結果
  生物指示劑
基本要求：
1、菌種的耐受性應大於需滅菌產品中所有可能汙染菌的耐受性。
2、菌種應無致病性。
3、菌株應穩定，存活期長，易於保（bǎo）存。
4、易於培（péi）養。若使（shǐ）用休眠（mián）孢子，孢子含量在90%以上。
常用生物指示劑
1、濕熱（rè）滅菌：嗜熱脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
2、幹熱滅菌：枯草芽孢杆菌孢子（zǐ）（ATCC9372等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
3、輻射滅菌：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子數為5×107-5×108個/片)
4、氣體滅（miè）菌：
（1）環氧乙烷滅菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105-5×106個/片（piàn）)
  （2）氣態過氧化氫滅菌：嗜熱脂肪芽孢杆菌孢子（zǐ）（ATCC7953等，活孢子數為1×106-5×106個/片)

（3）過濾除菌法：缺（quē）陷（xiàn）假（jiǎ）單胞菌（jun1）（ATCC19146等（děng））。