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關鍵詞: 實驗室湖南（nán）微生物實驗室

益陽微生物實驗室裏的滅菌法（fǎ）你知道（dào）嗎？

時間: 2021-12-09 10:05:32 來源: 湖南貝塔實驗室設備（bèi）有限公司

微生物實（shí）驗室常用的器材一般（bān）包（bāo）括玻璃器材、金屬器械、橡膠製品及塑料製品等，每類器材的處（chù）理（lǐ）及消毒（dú）措施都有不同。嚴格的消毒滅菌工作極為重要，直接影響著整（zhěng）個（gè）實驗能否（fǒu）順利進行。下麵就和貝塔的小編一起來看看（kàn）微生物實（shí）驗室有哪些消毒滅菌的方式吧！

一、消毒（dú）滅菌方法

目（mù）前，常用的消毒滅菌方法多（duō）采用物（wù）理方（fāng）法(如，幹熱滅（miè）菌法、濕熱滅菌法、過濾除（chú）菌（jun1）法、射線殺菌（jun1）法等)和化學方法(消毒劑、抗生素)兩大類。

1.幹熱滅菌法
  是利用恒溫（wēn）幹燥箱內120℃-150℃的高熱，並保持90-120分鍾，殺（shā）死細菌和芽孢，達到（dào）滅（miè）菌目（mù）的的一種方（fāng）法。主要（yào）適用於不便在壓力蒸汽滅菌器中進行滅菌，且不易被高（gāo）溫損壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的滅菌。用此方法滅菌的物品幹燥，易於貯存（cún）。酒精燈火焰燒灼滅菌（jun1）法（fǎ）也（yě）是屬於幹熱滅菌的方（fāng）法之一，在進（jìn）行動物細胞體外培養（yǎng）工作時，常（cháng）須利用（yòng）工作台麵上的（de）酒精燈火（huǒ）焰對金屬（shǔ）器具及玻（bō）璃器皿口緣進行補充滅菌。
2.濕熱滅菌法
  壓力蒸汽濕熱（rè）滅菌法是（shì）目（mù）前朂常用的一種滅（miè）菌方法。它利用高（gāo）壓蒸汽以及在蒸汽環境中存在（zài）的潛（qián）熱作用和良好的穿透力（lì），使菌體蛋白質凝固（gù）變性而使微（wēi）生物（wù）死亡。適合於布類工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸（zhēng）餾水、棉塞、紙和（hé）某些（xiē）培養液的滅（miè）菌。高壓（yā）蒸汽滅（miè）菌器的蒸汽壓力一般調整為1.0-1.1 kg/cm2，維持20-30min即可（kě）達到滅菌效果。
3.射線滅（miè）菌法
  利用紫外（wài）線燈進行照射滅菌的方法。紫外線是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫外線的（de）作用機製（zhì）是通過對微（wēi）生物的核酸及（jí）蛋白質等的破壞作用而使其滅活。適合於實驗室空氣、地麵、操作台麵滅菌。滅菌時間為30min。用紫外（wài）線殺菌時應注意，不能（néng）邊照射邊（biān）進行實驗操作，因為紫外（wài）線不僅對（duì）人體（tǐ）皮（pí）膚有（yǒu）傷害，而（ér）且對培養物及一些試劑等也會產生不良影響。
4.過濾除菌法（fǎ）
  是將液體或氣體通過有微孔的濾膜過濾，使大於濾膜孔（kǒng）徑的細菌等微生物顆粒（lì）阻留，從而達到除菌的方法（fǎ）。過濾除菌法大多用於遇（yù）熱易發生分解、變性而失效的試劑、酶液（yè）、血清、培（péi）養液等。
目前，常用微（wēi）孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正壓過濾除菌，或用玻璃（lí）細（xì）菌濾器、濾球負（fù）壓過（guò）濾除（chú）菌。濾膜孔徑（jìng）應在0.22-0.45μm範圍內或用更小的細（xì）菌濾膜，溶液通（tōng）過濾膜後，細菌和孢子等因大於濾膜孔徑（jìng）而被阻，並（bìng）利用濾膜的吸附作用，阻製小於濾膜孔徑的細菌透（tòu）過。
5.化學消（xiāo）毒劑消毒法（fǎ）
  用於那些不能利用物（wù）理方法進行滅菌的物品（pǐn）、空氣、工作麵、操作者皮膚、某些實驗器皿（mǐn）等。常用的化學消毒劑包括甲醛、高錳酸鉀、70%-75%乙醇、過氧（yǎng）乙酸、來蘇爾水（shuǐ）、0.1%新潔爾滅（miè）、環氧乙（yǐ）烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%-75%乙醇、0.1%-0.2%氯化汞、10%次氯酸鈉、飽（bǎo）和漂白粉等（děng）進行實驗材料的滅菌;利（lì）用甲醛加高錳酸鉀[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加熱熏蒸（zhēng）法進行無菌室（shì）和培養室的消毒。在使用時應注意安全，特別是用在皮膚或實驗材料上的消毒劑，須（xū）選用合適的藥劑種（zhǒng）類、濃度和處理時間，才能達到安全和滅菌的目的。
6.抗（kàng）生素抑菌法
  主要（yào）用於培養（yǎng）液，是培養過程中預防微生物汙染的重要手段以及作為微生物汙染不嚴重時的“急救”措施。常用的抗生素有青黴素、鏈黴素和新（xīn）黴素等（děng）。
  二（èr）、不同種類物品及培養物的（de）消毒（dú）滅菌（jun1）方法（fǎ）
1.無菌操作室滅菌
  培養材料進行培養、觀察或更換培（péi）養液（yè）時，必須從各方麵防止任何汙染物進入培養液或容器，所以無菌操作（zuò）室的滅菌（jun1）是（shì）至關（guān）重要的。由（yóu）於無菌（jun1）操作室的汙染來源主要是空氣（qì）中的細菌和真（zhēn）菌孢（bāo）子，因此（cǐ）長期停用後的無菌操作室應進行（háng）熏蒸滅菌，熏（xūn）蒸是用高錳酸（suān）鉀+甲醛[(2mL甲醛+1g高錳（měng）酸鉀)/m3]進行無菌室的滅菌。經（jīng）常使用的無菌操作室，在每次使用前（qián）都應進行地麵衛生清潔，並用紫外線燈照射30min，進行空氣滅菌。對超淨工作台，每次操作前用紫外燈照（zhào）射30min，然後用70%-75%酒精擦拭（shì）。
2.培養液（yè）滅菌（jun1）
  培養液（yè）在製備過程中帶有各種雜菌（jun1），分裝（zhuāng）後應立即滅菌（jun1），或在24小時內完成滅菌工序。目前常用過濾除菌法除（chú）去培養物操作液和培養液中（zhōng）的細菌。或對培（péi）養液（yè）中耐熱組分先進行高壓蒸汽滅菌，然後在無菌室加入經過過濾除菌的不耐熱溶液，混勻後分裝備用。
  使用高壓蒸汽滅菌器滅（miè）菌時，將分裝好的培養（yǎng）液放入底部有一定量(淹沒加熱管)涼水的高壓蒸汽滅菌器內，增（zēng）壓至0.35~0.4 kg/cm2時排淨滅菌器內冷空氣，以便使蒸（zhēng）汽能到達各個消毒（dú）部（bù）位，保證消毒滅菌徹底。然後繼續加壓加熱，當壓力表讀數達到1.0~1.1 kg/cm2為121℃，保持15~20min即可。由於消毒滅菌效果取決（jué）於溫度而（ér）不是壓力（lì），所以在一定壓力下保持（chí）較長的消毒滅菌時間是必須的（de）。在121℃的蒸汽溫度下可以很快殺死各（gè）種細菌（jun1）及高度耐熱的芽孢杆（gǎn）菌，因（yīn）此許多培養液的消毒滅菌壓力、溫度一般保持在1.0-1.1 kg/cm2、121℃。
  消毒滅菌時間與需要消（xiāo）毒（dú）滅菌的培養液量密切相關，時間不足達不到滅菌效果，時（shí）間過（guò）長培養液內的一些化學物質遭到破（pò）壞（huài），影響培（péi）養液成（chéng）分（fèn）。消毒滅菌結束後，關閉熱源，隻有當滅菌器內壓力降為（wéi）零時才能打開放（fàng）氣閥，排除剩餘蒸汽，取出培（péi）養液。不可在（zài）壓力較高時打開放氣閥，引起減壓沸騰，使容器中液體溢出。培養液組（zǔ）成中如含有遇熱易分（fèn）解的物質，則需用過濾方法消毒滅菌。首先對培養液中耐熱組分進行高（gāo）壓蒸汽滅菌（jun1）後放（fàng）置在無菌場所，固體培養液在40℃左右瓊脂（zhī）即將（jiāng）凝結前，加（jiā）入經過過濾除菌的不耐熱溶液，混勻後冷卻備用。
  液體培養液在冷卻到室溫後再加入過濾除菌溶液。過濾除菌時，使用孔（kǒng）徑為0.22-0.45μm或更小（xiǎo）的細（xì）菌濾膜。過濾除菌可利（lì）用抽濾裝置（zhì）或注射過濾器進行，所用（yòng）器皿均應進行（háng）高壓消毒滅菌，溫度不應超過121℃。
3.玻璃器皿、塑料器皿和器（qì）械滅菌
  玻璃器（qì）皿可進行幹熱滅菌或高（gāo）壓蒸汽滅菌，但在蒸（zhēng）汽滅菌後更好及時烘幹水分。對不（bú）能進行（háng）高壓蒸汽滅菌的塑料器皿可用75%酒精浸泡，使用前（qián）在無菌操作台（tái）麵上晾幹的同時，用紫（zǐ）外線重複殺菌。實驗室還可以用（yòng）環氧乙烷滅菌袋對（duì）塑料器皿進行消（xiāo）毒，消毒後的器皿要充分散氣2-4小時（shí）後才可使用。無菌操作（zuò）所用的各種器（qì）械，一般采用幹熱或高壓蒸汽滅菌，或（huò）用（yòng）75%酒精浸泡，然後在無菌操作台麵上晾幹的同時再用紫外線（xiàn）重複殺菌;在使用期間可多次對其進行酒（jiǔ）精燈火焰灼燒滅菌。
4.培養（yǎng）材料的消毒滅菌
  采自動物（wù）機體的實驗材（cái）料，攜（xié）帶著微生物及雜質，接種前須進（jìn）行表麵消毒滅菌，對內部已受微生物侵染的材料應予以淘汰。從（cóng）動物機體采集的某些組（zǔ）織塊，須用消毒劑進行浸泡處理，進行表麵（miàn）消毒。常用消毒（dú）劑有過氧化氫(10~12%，浸泡5~15 min)、過氧乙酸(0.05%，浸（jìn）泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。
  三、滅菌程序驗證內容
1、撰寫驗證方案及製定評估標準。
2、確認滅菌設備技術資（zī）料齊（qí）全、安裝正確，並能處於正常運行。
3、確認關鍵設備控製儀表在規定的參數範圍內能正常運行。
4、采用被滅菌物品或模擬物品（pǐn）進行（háng）重複實（shí）驗確（què）認滅菌效果符合規定。
5、完善文件記錄，撰寫（xiě）驗證報告。
  四、滅菌（jun1）程序運行監（jiān）控
1、關鍵參數應在驗證確定的範圍內：溫度、壓力（lì）、時間、濕度、滅菌氣（qì）體濃度、輻照劑量等（děng）。
2、滅菌程序定期驗證，時效不（bú）超過半年（nián）。
3、滅菌設備或程序發生變更重新進行驗證。
  五、滅菌保證
1、滅菌（jun1）效果與滅（miè）菌前產品（pǐn）汙染程度及汙（wū）染菌特性有關，把握微生物汙（wū）染水平及汙染菌耐受（shòu）性，注意各個環節降低汙染程度（dù）。
2、滅菌冷卻階段防止已滅菌物品再次汙染。
3、適用（yòng）生物指示（shì）劑、化學指示劑等監控滅菌結果
  生物指示劑（jì）
基本要求（qiú）：
1、菌種的（de）耐受性應大於需滅菌產（chǎn）品中所有可能（néng）汙染菌的（de）耐受（shòu）性。
2、菌種應無致病性。
3、菌株應穩定，存活（huó）期長，易於保存。
4、易於培養。若使用休眠孢子，孢子（zǐ）含量在90%以上。
常用生物指示劑
1、濕熱滅菌：嗜（shì）熱脂肪芽孢杆（gǎn）菌孢子（ATCC7953等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
2、幹熱滅菌：枯草芽孢杆菌孢子（zǐ）（ATCC9372等，活（huó）孢子數為5×105-5×106個/片)
3、輻射滅菌：短小芽孢杆菌孢子（zǐ）（ATCC27142等，活孢子數為5×107-5×108個/片)
4、氣體滅菌：
（1）環氧乙烷（wán）滅菌（jun1）：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105-5×106個（gè）/片)
  （2）氣態過氧化氫滅菌：嗜熱脂肪芽孢杆菌孢（bāo）子（ATCC7953等，活孢（bāo）子（zǐ）數為1×106-5×106個/片)

（3）過濾（lǜ）除菌法：缺陷假單胞菌（ATCC19146等）。