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關鍵詞（cí）: 實驗室湖南（nán）微生物實驗室

株洲（zhōu）微生物實驗室（shì）裏的滅菌法你知道嗎？

時間: 2021-12-09 10:05:32 來源: 湖南貝塔實驗室（shì）設備有限公司

微生物實驗室常用的器材一般包括玻璃器（qì）材、金屬器械、橡膠製品及塑料製（zhì）品等，每類器材的處（chù）理及消毒措施都有不同。嚴格的消毒滅菌工（gōng）作極為重要（yào），直接影響著整個實驗能否順利進行。下麵就和貝塔的小（xiǎo）編一起來看看（kàn）微生物實驗室有哪些（xiē）消毒滅菌的方式吧！

一、消毒滅菌方法

目前，常用的消毒滅菌方法多（duō）采（cǎi）用物理（lǐ）方法(如，幹熱滅菌法、濕熱滅菌法、過濾除菌法、射線殺菌法等)和化學方法(消毒劑、抗生素)兩大類。

1.幹熱滅菌法
  是利用恒溫幹燥箱內120℃-150℃的高熱，並（bìng）保持90-120分鍾，殺死細菌和芽孢，達（dá）到滅菌目的的一種方法。主要適用於不便在（zài）壓力（lì）蒸汽滅菌器中進行滅菌，且不易被高溫損壞的玻璃器皿、金屬器械以及不（bú）能和蒸汽接觸的物品的滅菌。用此（cǐ）方法滅菌的物品幹燥，易於貯存。酒精燈火焰燒灼滅菌法也是屬（shǔ）於幹熱滅菌的方法之一，在（zài）進行動物細胞體外培養工作時（shí），常須利用工作台麵上的酒精燈火焰對（duì）金屬器具及玻璃器皿口（kǒu）緣進行補充滅菌。
2.濕熱滅菌法
  壓力蒸汽（qì）濕熱滅菌法（fǎ）是目前（qián）朂常用的一種滅菌方法。它（tā）利用高壓（yā）蒸汽以及在蒸汽環境中存在的潛熱作用和良好的穿透力，使菌體蛋白質凝固變性而（ér）使（shǐ）微生物死亡。適合於布類工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸餾水、棉塞、紙和某（mǒu）些培（péi）養液的滅菌（jun1）。高壓蒸汽滅菌器的蒸汽壓力（lì）一般調整為1.0-1.1 kg/cm2，維持20-30min即可達到滅（miè）菌效果。
3.射線（xiàn）滅菌法
  利用紫外線燈（dēng）進行照射滅菌的（de）方法。紫外線是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫（zǐ）外線的作用機製是通過對微生物的核酸及蛋白質等的破壞作用而使其滅活。適合於實驗室空氣、地麵、操作（zuò）台麵滅菌。滅菌時間為30min。用紫外線殺菌時應注意，不能（néng）邊照射邊進行實驗操作，因（yīn）為（wéi）紫外（wài）線不僅對人體皮（pí）膚有傷害，而且對培養物及一些試劑等也會產生不良影響。
4.過濾（lǜ）除菌法
  是將液體或氣體通過有微孔（kǒng）的濾（lǜ）膜過濾，使大於（yú）濾膜孔徑的細菌等微生物顆粒阻留，從而達到除菌的方法。過濾除菌法大（dà）多用於遇熱（rè）易發生分解、變性而（ér）失效的試劑、酶液、血清、培養液（yè）等。
目（mù）前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料（liào）濾器正壓過濾除菌，或（huò）用玻璃細菌濾器、濾球負壓過濾除菌（jun1）。濾膜孔徑應在0.22-0.45μm範圍內（nèi）或用更（gèng）小的細菌濾膜，溶（róng）液通過濾膜後，細菌和孢子等因大於濾膜（mó）孔徑而被阻，並（bìng）利用濾膜的吸附（fù）作用，阻製小（xiǎo）於濾膜孔徑（jìng）的細菌透過。
5.化學消毒劑消毒法
  用於那些不（bú）能利用物理方法進行滅菌的物品、空氣、工作麵（miàn）、操作者皮（pí）膚、某些實驗器皿等。常用的化學消毒劑包括甲醛、高錳酸（suān）鉀、70%-75%乙醇（chún）、過（guò）氧乙酸（suān）、來蘇爾水、0.1%新潔爾滅、環氧乙（yǐ）烷、碘伏或（huò）碘（diǎn）酊等。其中利用70%-75%乙醇、0.1%-0.2%氯化汞、10%次氯（lǜ）酸鈉、飽和漂白粉等進行實驗材料的滅菌;利用甲醛加高（gāo）錳酸鉀[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]或（huò）乙二醇(6mL/m3)等加熱熏（xūn）蒸法進行無菌室（shì）和培養室的消毒。在使用時應注意安全，特別是用在皮膚或實驗材料上的消毒劑，須選用合適（shì）的藥劑種（zhǒng）類、濃度和處理時間，才能達到安全和滅菌的（de）目的。
6.抗生素抑菌（jun1）法
  主要用於培養液，是培養過程中預防微生物汙染的重要手段（duàn）以及作為微生物汙染（rǎn）不嚴重時的“急救（jiù）”措施。常用的抗生素有青黴素、鏈黴素和新（xīn）黴素等。
  二、不同（tóng）種類物品及培養物的消毒（dú）滅菌方法
1.無菌操作室滅菌
  培養材料進行培養、觀察或更換培養液時，必（bì）須從各方麵防（fáng）止任何汙染物進入培養液或容器，所以無菌操作室（shì）的（de）滅菌是至關重（chóng）要的。由於無菌操作室的汙染來源主要是空氣中的細菌和真菌孢子，因此長期（qī）停用後的無菌操（cāo）作室應（yīng）進行熏蒸滅（miè）菌，熏蒸是用高錳酸鉀+甲醛[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]進行無菌室的滅菌。經常使用的（de）無（wú）菌（jun1）操（cāo）作室（shì），在每次（cì）使用前都應進行地麵衛生清潔，並用紫外線燈照射30min，進行空氣滅菌。對超淨工作台，每次（cì）操作前用紫外燈照射30min，然後用70%-75%酒精擦拭（shì）。
2.培養液滅菌
  培（péi）養（yǎng）液在製備過程中（zhōng）帶有各種雜菌，分裝後應立即滅菌，或在24小時內完成滅菌工序（xù）。目前常用過濾除菌法除去（qù）培養物操作液和培養液中的細（xì）菌。或對培（péi）養液中耐熱組分先進（jìn）行（háng）高壓蒸汽滅菌，然後在無菌室加（jiā）入（rù）經過過濾除菌的不耐熱溶液，混勻後分裝（zhuāng）備用。
  使用高壓蒸汽滅菌器（qì）滅菌時（shí），將分裝（zhuāng）好的培養液放入底（dǐ）部有一定（dìng）量(淹沒加熱（rè）管)涼水的高（gāo）壓蒸汽滅菌器內，增壓至（zhì）0.35~0.4 kg/cm2時排淨滅菌器內冷空氣，以便使蒸汽（qì）能到達各個消毒部位，保證消毒滅（miè）菌徹底。然後繼續加壓加熱，當壓力表（biǎo）讀數達（dá）到（dào）1.0~1.1 kg/cm2為121℃，保持15~20min即可。由於消毒滅菌效果取決於溫度而不是壓力，所以（yǐ）在一定壓力下保持較長的消毒滅菌時間（jiān）是必須的。在121℃的蒸（zhēng）汽溫度下可以很快殺（shā）死各種細菌及高度耐熱的（de）芽孢杆菌，因此許多培養液的消毒滅菌壓力、溫度一般保持在（zài）1.0-1.1 kg/cm2、121℃。
  消毒滅菌時間與需要消毒滅菌的培養液量密切相關，時間不足達不到滅菌（jun1）效果，時間過長培養液內的一些化學物質遭到破壞，影響（xiǎng）培（péi）養液成分。消（xiāo）毒（dú）滅菌結束後，關閉熱源，隻有當滅菌器內壓力降為零（líng）時才能打開放氣閥，排除（chú）剩餘蒸汽，取出培養液。不可在壓（yā）力較高時打開放氣（qì）閥，引起減（jiǎn）壓沸（fèi）騰，使容器中液體溢出。培養液組成中如含有遇（yù）熱（rè）易分解的物質，則需用過濾方法消毒滅菌。首先（xiān）對培養液中耐熱組分進行高壓（yā）蒸汽滅菌後放置在無菌場所，固體培（péi）養液在40℃左右（yòu）瓊脂即將凝結前，加入（rù）經（jīng）過過濾除菌的不耐熱溶（róng）液，混勻後冷卻備用。
  液體培養液在冷卻到室溫後再加入過濾除菌溶液。過濾除菌（jun1）時，使用孔徑為0.22-0.45μm或更小的細菌濾膜。過濾除菌（jun1）可利用抽濾（lǜ）裝置或注射過濾器進行，所用器皿均應進行高壓消毒滅菌（jun1），溫度不應超過121℃。
3.玻璃器皿、塑料器皿和器械滅菌（jun1）
  玻璃器皿可進行幹熱滅菌或高壓（yā）蒸汽滅菌，但在蒸汽滅菌後更好及時烘幹水（shuǐ）分（fèn）。對不能（néng）進行高壓蒸汽滅菌的塑料器皿可用75%酒精（jīng）浸泡，使用前在無菌操作台麵上晾幹的同時，用紫外線重複殺菌。實驗室還可以用環（huán）氧乙烷滅菌袋對塑料器皿進行消毒，消毒後（hòu）的器皿要充分散氣2-4小時後才可使（shǐ）用。無菌操作所（suǒ）用的（de）各種器械，一般采（cǎi）用幹熱或高壓蒸汽滅菌，或用（yòng）75%酒精浸（jìn）泡，然後在無菌操作台（tái）麵上（shàng）晾幹的同時再（zài）用紫外線重複殺菌;在使用期間可多次對其進行酒精燈火焰灼燒滅菌。
4.培養材料的消毒滅菌
  采自動物機體的實驗材料，攜帶著微生物及雜質，接種（zhǒng）前須進行表麵消毒滅菌，對（duì）內部（bù）已受微生物侵染的材料應予以淘汰。從動物機體采集（jí）的某些（xiē）組織塊，須用消毒劑進行浸泡處理，進行表麵消毒。常用消毒劑（jì）有（yǒu）過氧化氫(10~12%，浸泡5~15 min)、過氧乙酸(0.05%，浸（jìn）泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。
  三、滅菌程序驗證內容
1、撰寫驗證方案及製定（dìng）評（píng）估標準。
2、確認（rèn）滅菌設備技術資料齊全、安裝正確，並能處於正常運行。
3、確（què）認（rèn）關鍵設備控製儀表在規定的參數範圍內能（néng）正常運行。
4、采用被滅菌物品或模擬物品進行重複實驗確認滅菌效果符合規定。
5、完（wán）善文件記錄，撰（zhuàn）寫驗證報告。
  四、滅菌程（chéng）序運行監控
1、關鍵參數應在驗證確定的範圍內：溫度、壓力、時間、濕（shī）度、滅菌氣體（tǐ）濃度、輻照劑量等（děng）。
2、滅菌程序定期（qī）驗證，時效不超（chāo）過半年（nián）。
3、滅菌設備或程序發生變更重新進行驗證。
  五、滅菌保證
1、滅（miè）菌效果與滅菌前（qián）產（chǎn）品汙染程度及汙染菌特性有關，把握微生物汙染水（shuǐ）平及汙染菌耐受性，注意各個環節降低汙染程度。
2、滅菌冷卻階段防止已滅菌物品再次汙染（rǎn）。
3、適用（yòng）生物指示劑、化學（xué）指示劑等監控（kòng）滅菌結果
  生物指（zhǐ）示劑
基本要求：
1、菌種的耐受（shòu）性應大於（yú）需滅菌產（chǎn）品中所有可能汙染菌的耐受性。
2、菌種（zhǒng）應無致病性。
3、菌株應穩定，存活期長，易於保存。
4、易於培養。若使用休（xiū）眠孢子，孢子含量在90%以上。
常用生物指示劑
1、濕熱滅菌（jun1）：嗜熱脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
2、幹熱滅菌：枯（kū）草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
3、輻射滅菌：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子數為5×107-5×108個（gè）/片)
4、氣體滅菌：
（1）環氧（yǎng）乙烷（wán）滅菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105-5×106個/片)
  （2）氣態（tài）過（guò）氧化氫滅菌：嗜熱脂肪芽孢（bāo）杆菌孢子（zǐ）（ATCC7953等，活孢子數為1×106-5×106個/片)

（3）過濾除菌法：缺陷假單胞菌（ATCC19146等（děng））。