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关键（jiàn）词: 实（shí）验室湖南（nán）微生物（wù）实验室

微生物实验室里的灭菌法你知道吗？

时（shí）间: 2021-12-09 10:05:32 来源: 湖南贝塔实验（yàn）室设（shè）备有限公司

微生物实验室常用的器材（cái）一般包括玻璃器材、金属器械、橡胶（jiāo）制品及塑料制品等，每类器材的处理及消毒措施都有不同。严格的消（xiāo）毒灭菌工作极为重要，直接影响着整个实验能否顺利进行。下面就（jiù）和贝塔的小编（biān）一起来看看微生物实验室有哪些消毒灭菌的方式吧！

一、消毒灭菌（jun1）方法

目前，常用的消毒（dú）灭菌方法多采用物理方法(如，干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法（fǎ）(消毒剂、抗生素)两大类（lèi）。

1.干热灭菌法
  是利用恒温干（gàn）燥箱内120℃-150℃的高热，并保持90-120分（fèn）钟，杀死细菌（jun1）和芽孢，达到（dào）灭菌目的的一种方法。主要适用于不便在压力（lì）蒸汽灭菌（jun1）器中进（jìn）行灭菌（jun1），且不易（yì）被高温损坏的玻璃器皿（mǐn）、金属器械以及不能和蒸汽接触的（de）物品的灭菌。用此方法灭菌的物品（pǐn）干燥，易于贮存。酒精灯火焰烧（shāo）灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一，在（zài）进行动（dòng）物细胞（bāo）体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿（mǐn）口缘进行补充灭菌。
2.湿（shī）热灭菌法
  压力（lì）蒸汽湿热灭菌法是目前朂常用的一种灭菌方法。它利用（yòng）高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的（de）穿透力，使菌体蛋白质凝（níng）固变性而使（shǐ）微生物死亡。适合于布类工作衣、各种器皿（mǐn）、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。高压（yā）蒸汽灭菌器的蒸汽（qì）压（yā）力一般调整为1.0-1.1 kg/cm2，维持20-30min即可达到灭菌效果。
3.射线灭（miè）菌法（fǎ）
  利用紫外线（xiàn）灯进行照射灭菌的（de）方法。紫外线是一种低能量（liàng）的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。紫外线的作用机（jī）制是通过对微生物的（de）核（hé）酸及蛋白质等的破（pò）坏作用而使其（qí）灭（miè）活。适合于（yú）实验室（shì）空气、地面、操（cāo）作台面（miàn）灭菌。灭菌时间为30min。用紫外线杀菌时应注意，不能边照射边（biān）进行实验操作，因为紫外（wài）线不仅对人体皮肤有伤害（hài），而（ér）且对培养物及一些试剂等也会产生不良影响。
4.过滤除菌法
  是将（jiāng）液体或气体通过有微孔的（de）滤膜过滤，使（shǐ）大于滤膜孔径（jìng）的细菌等（děng）微生物颗粒阻留，从而达（dá）到除菌的方法。过滤除菌法大多用于遇热易发生分解、变性（xìng）而失效的试剂、酶液、血（xuè）清、培养液等。
目前，常用微孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细（xì）菌滤器、滤球负压过（guò）滤除菌。滤膜孔径应在0.22-0.45μm范围内或用更小的细（xì）菌滤膜（mó），溶液通过滤（lǜ）膜后，细菌和孢子等（děng）因大于（yú）滤膜孔径而被阻，并利用（yòng）滤（lǜ）膜的吸附作用，阻制小于滤膜孔径的细菌（jun1）透过。
5.化学消毒剂消毒法
  用于那些不能利用物理（lǐ）方法进行灭菌的（de）物品、空气、工作面、操作者皮肤（fū）、某些（xiē）实验器皿等。常用的化学消毒剂包括甲醛、高（gāo）锰酸钾、70%-75%乙醇、过氧乙酸、来苏尔水、0.1%新洁尔灭、环氧乙烷（wán）、碘伏或碘酊等。其中利用70%-75%乙醇、0.1%-0.2%氯化汞、10%次氯（lǜ）酸钠、饱（bǎo）和漂白粉等进行实验材料的灭菌;利用甲醛加高锰酸钾[(2mL甲醛+1g高锰酸钾)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加热熏（xūn）蒸法进行（háng）无菌室和培养室的消毒。在使用时应注意安全，特别是用在皮肤或实验材料上的（de）消毒剂，须选用合适的药剂种类、浓度（dù）和处理时间，才能达到安全和灭菌的目的。
6.抗生素抑菌法
  主要用（yòng）于培养液，是培养过（guò）程中预防微生物污染的重要手段以及作为（wéi）微生物污染不严重时（shí）的“急救”措施。常用的抗生素有（yǒu）青霉素、链霉素和新霉素（sù）等（děng）。
  二、不（bú）同种类物品及培养物的消毒（dú）灭菌方法
1.无菌操作室灭菌
  培养材料进行培养、观察或更换培养液时，必须从各方面防止任（rèn）何污染物进（jìn）入培养液或容器，所以无菌操作室（shì）的灭菌（jun1）是至关（guān）重要的。由于无（wú）菌操作室的污染来源主要是空气中的细菌和真菌（jun1）孢（bāo）子，因此长期停用后（hòu）的无菌操（cāo）作室应进行熏蒸灭菌，熏蒸是用高锰酸钾+甲醛[(2mL甲醛+1g高锰酸钾（jiǎ）)/m3]进行无（wú）菌室的灭菌。经常使（shǐ）用的无菌操作室，在每次使用前都（dōu）应进行地面卫生清洁（jié），并用紫外线灯照射30min，进行空气灭（miè）菌。对超净（jìng）工作台，每（měi）次（cì）操（cāo）作前用紫外灯照射30min，然后用70%-75%酒精擦（cā）拭。
2.培养液灭菌
  培养液在制备过程中带有（yǒu）各种杂菌，分装后应立即灭菌，或在（zài）24小时内完成灭菌工序。目（mù）前常用过滤除菌法除（chú）去（qù）培养物操作液和培（péi）养液中的细菌。或对培养液中耐热组分先进行高压蒸汽灭菌，然后在无菌室加入经过过（guò）滤除菌的不耐热溶液，混匀（yún）后分装备用。
  使用高（gāo）压蒸（zhēng）汽灭菌器（qì）灭菌时，将分装好的培养液放入底部有一定（dìng）量(淹没加（jiā）热管)凉水的高压蒸汽灭菌器内，增压至0.35~0.4 kg/cm2时排净灭菌器内冷空气，以便使（shǐ）蒸汽能到达各个消毒部位，保（bǎo）证消（xiāo）毒（dú）灭（miè）菌彻底（dǐ）。然后继续加压加（jiā）热，当压力表读数达到1.0~1.1 kg/cm2为121℃，保持15~20min即可。由于消毒灭菌效果取决于（yú）温（wēn）度而不是压力，所以在一定压力下保持（chí）较长的（de）消毒灭（miè）菌时间是必须的。在121℃的蒸汽温度下可以很快杀死各种细菌及高度耐热的芽孢杆菌，因此许多培养（yǎng）液的消毒灭菌压力、温度一（yī）般保持（chí）在1.0-1.1 kg/cm2、121℃。
  消毒灭菌时间与需要消毒灭菌的培养（yǎng）液量密切相关，时（shí）间不足达不到（dào）灭菌效果，时间过长培养液内的一些化学物（wù）质遭到破坏，影响培养液成分。消毒灭菌结束（shù）后，关闭热（rè）源（yuán），只有（yǒu）当灭菌器内压力降为零时才能打开放气阀，排除剩余蒸汽，取出培养液。不（bú）可在压力较高时打开放气阀，引起减压沸腾，使容器中液体溢出。培养液组（zǔ）成中如含有遇热易分解的物质，则（zé）需用过滤方法消（xiāo）毒灭菌。首先（xiān）对培（péi）养液中耐热组（zǔ）分进行高压蒸（zhēng）汽灭菌后放（fàng）置在无菌场所，固体培养液在40℃左右琼脂即将凝结前，加入经过过滤除菌的不耐热溶液，混匀后冷却备用。
  液体培养液在冷却到室温后（hòu）再加（jiā）入过滤除菌溶（róng）液。过滤（lǜ）除菌时（shí），使用孔径为0.22-0.45μm或更小的（de）细菌（jun1）滤膜。过滤除（chú）菌可（kě）利用抽滤装置或注射过滤器进行，所用器皿均应进行（háng）高压消毒灭菌，温度不应超过121℃。
3.玻璃器皿、塑料器皿和器械灭菌
  玻璃器皿可进行干热灭菌或高压蒸汽灭菌，但在（zài）蒸汽灭菌后更好（hǎo）及时烘干水分。对不能进行高压蒸汽灭菌的塑料器皿可（kě）用（yòng）75%酒精浸泡，使用前在无菌操作台（tái）面上晾（liàng）干的同时，用紫外线重复杀菌。实验室还可以用环氧乙烷灭菌袋对塑料器皿进行消毒，消毒后的器皿要充分散气（qì）2-4小时后才可使用。无菌（jun1）操作所用的各（gè）种（zhǒng）器械，一（yī）般采用干热或高压蒸（zhēng）汽灭菌，或用75%酒精浸泡，然后在无菌操（cāo）作台面上晾干的（de）同（tóng）时再（zài）用紫外线（xiàn）重复杀菌;在使用期间可多（duō）次对（duì）其进行酒精灯火焰灼（zhuó）烧灭菌。
4.培养材料的消毒灭菌
  采自动物机体的（de）实验材料（liào），携带着微生物及杂质，接种前须进行表面消毒灭菌，对内部已受微生物（wù）侵染的材料应予以淘汰。从动物机体采集的某些组织块，须用消毒剂进行浸泡处理，进行表面消毒（dú）。常用消毒剂有过氧化氢(10~12%，浸泡5~15 min)、过氧乙酸（suān）(0.05%，浸（jìn）泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。
  三、灭菌程（chéng）序验证内容
1、撰写（xiě）验证（zhèng）方案及制定（dìng）评（píng）估标准。
2、确认灭（miè）菌设备技术资料齐（qí）全、安装正确，并能处（chù）于正（zhèng）常运行。
3、确认关键（jiàn）设备控（kòng）制仪表在规定（dìng）的参数范（fàn）围内能正常运行。
4、采用被灭菌物品或模（mó）拟物品进行重复实验确认灭菌效果符合规定。
5、完善文件记录，撰写验证（zhèng）报告。
  四、灭菌程序运行监控
1、关键参数应在验证（zhèng）确定的范围内：温度、压力、时间、湿（shī）度、灭菌气体浓度、辐照剂量等。
2、灭菌程序（xù）定（dìng）期（qī）验证，时效不超过半年。
3、灭菌（jun1）设备（bèi）或程序发生变更重新进行验证（zhèng）。
  五（wǔ）、灭菌保证
1、灭菌效果与灭菌前产品（pǐn）污染（rǎn）程度及污染菌特性有关，把握微（wēi）生（shēng）物污染水平及污染（rǎn）菌耐受性，注意各个环节降低污染程度。
2、灭菌冷却阶段防止已灭菌物品再次污染。
3、适用生物指示（shì）剂、化学指示剂等监控灭（miè）菌结果
  生物指示（shì）剂
基本要求：
1、菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染菌（jun1）的耐受性。
2、菌种应无致病（bìng）性。
3、菌株应稳定，存活期长（zhǎng），易于保存。
4、易于培养（yǎng）。若（ruò）使用休眠孢子，孢子含量在90%以上。
常用生物（wù）指示剂
1、湿热灭菌：嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活（huó）孢子数为5×105-5×106个/片)
2、干热灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子数为5×105-5×106个（gè）/片)
3、辐（fú）射灭菌（jun1）：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子数为5×107-5×108个/片)
4、气体灭菌：
（1）环氧乙烷灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（zǐ）（ATCC9372等，活（huó）孢子数为5×105-5×106个/片)
  （2）气（qì）态过氧化氢灭菌：嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子数为1×106-5×106个/片（piàn）)

（3）过滤除菌法：缺陷假单胞菌（ATCC19146等）。