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湘（xiāng）潭微生物实验室里的灭菌法你知道吗？

时间: 2021-12-09 10:05:32 来（lái）源（yuán）: 湖南贝塔实验室设（shè）备有限公司

微生物实验室常用的器材一般包括玻璃器材、金属器械、橡胶制品及塑料制品等，每类器材的（de）处理及消毒措施都有不同。严格的消毒灭菌工作极为重要，直（zhí）接影响着整个实验能否顺利进行。下面就和贝塔的小编一起来看看微生物实验室有哪些消毒灭菌的方式吧！

一、消毒灭菌方（fāng）法

目前，常用的消毒灭菌方（fāng）法多（duō）采用物理方法（fǎ）(如，干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法（fǎ）等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。

1.干热灭（miè）菌法
  是利用恒温（wēn）干燥（zào）箱内120℃-150℃的高热，并保持90-120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种（zhǒng）方法。主要适用于（yú）不便（biàn）在压力蒸汽灭（miè）菌（jun1）器中进行灭菌，且不易被（bèi）高温损（sǔn）坏的玻（bō）璃器皿、金属器械以（yǐ）及不（bú）能和蒸汽接触的物品的灭菌。用（yòng）此方法灭菌的物品（pǐn）干（gàn）燥（zào），易于贮存。酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一，在进行动物细胞体外培养工作时（shí），常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌（jun1）。
2.湿热灭菌法
  压力蒸（zhēng）汽湿（shī）热灭菌法是目前朂常用的一（yī）种灭菌（jun1）方法。它利用高压蒸汽以及在（zài）蒸汽环境中（zhōng）存在的潜热作（zuò）用和良好的穿（chuān）透力，使（shǐ）菌体（tǐ）蛋（dàn）白质凝固变性而使微生物死亡。适合于布类工作衣、各种器（qì）皿（mǐn）、金属器械、胶塞、蒸（zhēng）馏水、棉塞（sāi）、纸和某些培养液的灭菌。高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一（yī）般调整为1.0-1.1 kg/cm2，维持20-30min即可（kě）达到灭菌效（xiào）果。
3.射线灭菌法
  利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。紫外线是一种低能量的电磁辐射，可（kě）以（yǐ）杀灭多种微生（shēng）物。紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。灭（miè）菌时间为（wéi）30min。用紫外线杀菌时应注意，不能（néng）边照射边进行实验操作，因为紫外（wài）线不仅对人体皮肤有伤害，而且对培养物及一些（xiē）试剂等也会产生不良影（yǐng）响。
4.过滤除菌法
  是将液体或气体通过有微（wēi）孔的滤膜过滤，使大于滤膜孔径的细（xì）菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌的方法。过滤除菌法（fǎ）大多用于遇热（rè）易（yì）发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液（yè）等。
目前，常用（yòng）微（wēi）孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细菌滤器、滤球负压过滤除菌。滤膜孔（kǒng）径应在0.22-0.45μm范（fàn）围（wéi）内或用（yòng）更（gèng）小的细菌滤膜，溶液通过滤膜后，细菌和孢子等因（yīn）大于滤膜孔径而被阻，并利用（yòng）滤膜的吸附作用，阻（zǔ）制小于滤膜孔径的细菌透过（guò）。
5.化学消毒剂消毒法
  用于那些（xiē）不（bú）能利用（yòng）物理方法进行灭菌的物品、空气、工作面、操作者皮肤、某些实验器皿等。常用的化学消毒剂包括甲醛、高锰酸钾、70%-75%乙醇（chún）、过（guò）氧（yǎng）乙酸、来苏尔水、0.1%新洁尔灭、环氧乙烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%-75%乙（yǐ）醇、0.1%-0.2%氯化汞、10%次氯酸钠、饱和漂白粉等进行实验材（cái）料的灭菌;利用甲（jiǎ）醛加高锰酸钾[(2mL甲醛+1g高锰酸钾)/m3]或乙二（èr）醇(6mL/m3)等加热熏蒸法进行无菌室和培养（yǎng）室的消毒。在使用时（shí）应注意安全，特别是用在皮肤或（huò）实验材料上的（de）消毒剂，须选用合适的药剂种类、浓度和处理时间，才能达到安全和灭菌的（de）目的。
6.抗生素抑菌法
  主要用于（yú）培养液（yè），是培养过程（chéng）中预防微生物污染的重要（yào）手（shǒu）段以及作为微生物污（wū）染不严重（chóng）时的“急救”措施。常用的抗生素有青霉素、链霉素和新霉素等。
  二、不同种类物（wù）品及培养物的消毒灭菌方（fāng）法（fǎ）
1.无菌操作室灭菌
  培养材料进行培养、观察或更换（huàn）培（péi）养液时，必须从各方面防止任何污染物进入培（péi）养液或容器，所以（yǐ）无菌操作室的灭菌是至（zhì）关重（chóng）要的。由于无菌操作室的污染来源主要是空气中的细菌和真（zhēn）菌孢子，因此（cǐ）长期停用后的无菌操作室应进行熏蒸灭菌，熏蒸是用高锰酸钾+甲醛[(2mL甲醛+1g高锰酸钾)/m3]进行无菌（jun1）室（shì）的灭（miè）菌。经常使用的无菌操作（zuò）室，在每次使用前都（dōu）应进行地面卫生清洁，并用紫外线灯（dēng）照（zhào）射30min，进（jìn）行空气灭菌。对超净工作台，每次操作前用紫外灯照射30min，然（rán）后用70%-75%酒精擦拭。
2.培养液灭菌（jun1）
  培养液（yè）在制备过程中带有各种（zhǒng）杂菌，分装后应立（lì）即灭菌，或在24小时内完成灭菌工序。目（mù）前常用过（guò）滤除菌法除去培养物操作液和培养液中的细菌。或对培养液中耐热组分先进行高压蒸汽灭菌，然后在无菌室（shì）加入经过（guò）过滤除菌的不（bú）耐热溶液，混匀后分装备用。
  使用高压蒸汽灭菌器灭菌时，将分装好的培养（yǎng）液放入底部有一定量(淹没加热管)凉水（shuǐ）的高压蒸（zhēng）汽灭菌器内，增压至0.35~0.4 kg/cm2时排净灭菌器内冷（lěng）空气，以便使蒸汽能（néng）到达各个消毒部位，保证消毒灭菌彻底。然后（hòu）继续加压加热，当压力表读（dú）数达到1.0~1.1 kg/cm2为121℃，保持15~20min即可。由于消毒灭菌效果取决于温度而不是压力，所以在一定（dìng）压力（lì）下保持（chí）较长（zhǎng）的消毒灭菌时间是必须的。在121℃的蒸汽温度下可以很快杀死（sǐ）各种细菌及高度耐热的芽孢（bāo）杆菌，因此许多培（péi）养液的消毒（dú）灭菌（jun1）压力、温度一般保持（chí）在（zài）1.0-1.1 kg/cm2、121℃。
  消毒灭菌时间与需要消毒灭菌的培养液量密切相关，时间不足达不到灭菌效果（guǒ），时间（jiān）过长培养液内（nèi）的一些化学物质遭到破坏，影响培养液成分。消毒灭菌结束后（hòu），关闭热源，只有当灭（miè）菌器内压力降为零时才能打开放气阀，排除剩余蒸汽，取出（chū）培养液。不可在压力较高时打开放气阀（fá），引起减压沸腾，使容器中液体溢出。培养液组成中如含有遇热易分解的物质，则需用过滤方法消（xiāo）毒灭菌。首先对培养液中（zhōng）耐热组分进行高（gāo）压（yā）蒸汽灭（miè）菌后放（fàng）置在无菌场所，固体培养（yǎng）液在40℃左右琼脂即将凝结前，加入经过过滤除菌（jun1）的（de）不耐热溶液，混匀（yún）后（hòu）冷却备用。
  液（yè）体（tǐ）培养液在冷却到室温（wēn）后再加入过滤除菌溶液（yè）。过滤除菌时，使用孔径为0.22-0.45μm或更小的细菌滤膜。过滤（lǜ）除菌可利用抽滤装置（zhì）或注射过滤器进行，所（suǒ）用器皿均应进行高压消毒灭菌，温度不应超过121℃。
3.玻（bō）璃器皿、塑料器（qì）皿和器械灭菌
  玻璃器皿可进行干热灭菌或高压蒸汽灭菌，但在蒸汽灭菌后更好及时烘干水分。对不能进（jìn）行高压蒸汽灭菌的塑料器皿可用75%酒（jiǔ）精浸泡，使用（yòng）前在无菌操作（zuò）台面上晾干的同时，用（yòng）紫外（wài）线重复杀菌。实验室还可以用环氧乙烷灭菌袋对塑料器皿进（jìn）行消毒，消毒后的器皿要充分散气2-4小时后才可使用。无菌操作（zuò）所用的各种器（qì）械，一般采用干热或高（gāo）压蒸汽灭菌，或（huò）用75%酒（jiǔ）精浸泡，然后在无菌操作台面上晾干的同时再用紫外线重复杀菌（jun1）;在使用（yòng）期间可多次对其进（jìn）行酒精灯火焰灼烧灭菌。
4.培养材料的消毒灭菌
  采自动物机体的实验材料，携（xié）带着微生物及杂质，接种前须（xū）进行表面消毒灭菌，对内部已受微生（shēng）物侵染的材料应予以淘汰。从动物机体采集的（de）某些组织（zhī）块，须（xū）用消毒（dú）剂进行浸泡处理，进行表面消毒（dú）。常用消毒剂有过氧化氢(10~12%，浸泡5~15 min)、过氧乙酸（suān）(0.05%，浸泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。
  三、灭菌程序验证（zhèng）内容
1、撰（zhuàn）写验证方案及制定评（píng）估（gū）标准。
2、确认灭（miè）菌设备技术（shù）资料齐全（quán）、安装正确，并（bìng）能处于正常运行。
3、确认关键设备控（kòng）制仪表在规定的参数（shù）范围内能正常运行。
4、采（cǎi）用被灭菌物品（pǐn）或模拟物品进行重复实验确认灭菌效（xiào）果符合规定。
5、完善文件记录，撰写验证报告。
  四、灭菌程序（xù）运行监控
1、关键参数应在验（yàn）证确（què）定的范围内：温度、压力、时（shí）间（jiān）、湿度、灭菌气体浓（nóng）度、辐照剂（jì）量等。
2、灭菌程序定期验证，时效（xiào）不超过半年。
3、灭菌设备或程序发生变更重新（xīn）进行验证。
  五、灭菌保证
1、灭菌效果与灭菌前产品污染程度及污染菌（jun1）特（tè）性有关，把握微生（shēng）物污染水平及污（wū）染菌耐受性，注意各（gè）个环节降低（dī）污染程度。
2、灭菌冷（lěng）却阶段防止已灭菌物品再次污染。
3、适用生（shēng）物指示剂、化学指示剂（jì）等监控灭菌结果
  生物（wù）指示剂
基本要求：
1、菌种的耐受性应大于（yú）需灭菌产品中所有可能污染菌的耐受性。
2、菌种应无致病性。
3、菌株应稳（wěn）定（dìng），存（cún）活期长，易于保存。
4、易于培（péi）养。若使用休眠孢子，孢子（zǐ）含量在90%以（yǐ）上。
常用（yòng）生物指示剂（jì）
1、湿（shī）热灭菌：嗜热（rè）脂肪芽孢杆菌孢（bāo）子（ATCC7953等，活孢子数（shù）为5×105-5×106个/片（piàn）)
2、干热灭菌：枯草（cǎo）芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子数（shù）为5×105-5×106个/片)
3、辐射灭（miè）菌：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等（děng），活孢子（zǐ）数（shù）为5×107-5×108个/片)
4、气体灭菌（jun1）：
（1）环氧乙烷（wán）灭菌：枯草芽孢杆（gǎn）菌孢子（ATCC9372等，活孢子数为5×105-5×106个/片)
  （2）气态过氧化氢灭菌：嗜热脂肪（fáng）芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子数为（wéi）1×106-5×106个/片（piàn）)

（3）过滤除菌法：缺陷假单胞菌（jun1）（ATCC19146等）。